土壤修复过程中微生物数量、酶活性与石油降解率的关系.pdf

2 0 1 4年 2月 石油学报 石油加工 A C T A P E T R O L E I S I N I C A P E T R O L E U M P R O C E S S I N G S E C T 1 0 N 第 3 O卷第 1 期 文 章 编 号 1 0 0 1 8 7 1 9 2 0 1 4 0 1 0 0 9 4 0 6 土壤修复过程中微生物数量、酶活性与 石油降解 率的关 系 张秀 霞，武海杰 ， 白雪 晶， 中国石油大学 环境与安全工程系 ， 郭云 山东 青 岛 霞，张守娟 2 6 6 5 8 0 摘要 在优化降解条件下投加高效石油降解菌 ，在恒温恒湿 的培 养箱 中，用花 盆对石油 污染土 壤进行 2 8 d模拟 原 位修复 。考察修复过程 中微生物 细菌 、真菌和放 线菌 数量 、土壤酶活性 以及 石油降解率 的变化 ，用 S P S S 1 8 ． 0对 数据进行统计分析 ，研究微 生物 数量 、土 壤酶活 性与 石油 降解率 的相关性 。结果表 明 ，细 菌数量 和微 生物 总数 、 脲酶 、过氧化氢酶 和多 酚氧化 酶活 性与 石油 降解 率相 关性 非 常显 著 ，相 关性 系数 分别 为 0 ． 9 8 9 、0 ． 9 7 7 、0 ． 9 9 4 、 0 ． 9 6 4和 0 ． 9 8 8 ；蛋 白酶和脱氢酶活性与石油降解 率相关性显著 ，相关性 系数 分别 为 0 ． 9 4 4和 0 ． 9 3 4 ；真菌数量和放 线菌数量与石油降解率相关性不显著 。 关键词 石油 ；高效降解菌 ；微生物数量 ；酶活性 中图分类号 X 5 3 文献标识码 A d o i 1 0 ． 3 9 6 9 ／ j ． i s s n ． 1 0 0 1 8 7 1 9 ． 2 0 1 4 ． 0 1 ． 0 1 5 Re l a t i o n s h i p B e t we e n Mi c r o o r g a n i s m P o p u l a t i o n Qu a n t i t y，S o i l En z y me Z HANG Xi u x i a ，WU Ha i j i e ，BAI Xu e j i n g，GUO Yu n x i a ，Z HANG S h o u j u a n D e p a r t me n t o f E n v i r o n me n t a l a n d S a f e t y En g i n e e r i n g， C h i n a Un i v e r s i t y o f P e t r o l e u m， Qi n g d a o 2 6 6 5 8 0 ， C h i n a Abs t r a c t Und e r o pt i m i z e d de gr a d a t i on c o nd i t i ons ， do s i ng hi g hl y e f f i c i e nt p e t r o l e um de g r a d i ng b a c t e r i a t o o i 1 c o n t a mi n a t e d s o i l 。mi c r o o r g a n i s m i n s i t u r e me d i a t i o n i n c o n s t a n t t e mp e r a t u r e a n d humi d i t y i nc ub a t o r wa s s i mul a t e d f or 2 8 d i n f l o we r po t ． Thr o u gh c ha n ge s o f m i c r o or g a ni s m b a c t e r i a ，f u n g i a n d a c t i n o my c e t e s p o p u l a t i o n q u a n t i t y ， s o i l e n z y me a c t i v i t y a n d o i l d e g r a d a t i o n r a t e i n r e me d i a t i on， t h e d a t a we r e s t a t i s t i c a l l y a na l y z e d wi t h S PSS1 8 ． 0 t o s t u dy t h e c o r r e l a t i o ns b e t we e n mi c r o o r ga n i s m po pu l a t i on q u an t i t y，s oi l e nz y m e a c t i v i t y a nd oi l de g r a d a t i on r a t e ． Re s u l t s s h o we d t h a t t h e c o r r e l a t i o n s b e t we e n b a c t e r i a q u a n t i t y a n d t o t a l n u mb e r o f mi c r o o r g a n i s m ，u r e a s e ， c a t a l a s e a nd po l y phe no l ox i da s e a c t i vi t y a nd o i l de gr a d a t i o n r a t e we r e ve r y s i gn i f i c a nt wi t h t he c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e nt of 0 ．9 8 9， 0 ．9 7 7，0 ．9 9 4，0． 9 6 4 a nd 0 ． 98 8， r e s p e c t i v e l y ． Th e c or r e l at i o ns b e t we e n p r o t e a s e ， d e h y d r o g e n a s e a n d o i 1 d e g r a d a t i o n r a t e we r e s i g n i f i c a n t wi t h t h e c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t o f 0 ． 9 44 a n d 0 ． 9 3 4，r e s pe c t i v e l y ．The c o r r e l a t i o ns be t we e n f u ng i qu a nt i t y，a c t i no myc e t e q u a nt i t y a n d oi l de gr a da t i o n r a t e we r e no t s i gni f i c a nt ． Ke y wo r d s o i l ； hi g hl y e f f i c i e nt de gr a d a t i o n b a c t e r i a； m i c r o or g a n i s m p o pul a t i o n qu a n t i t y； e nz y m e a c t i v i t y 收稿 日期 2 0 1 3 - 0 2 0 4 基 金项 目中国石油科 技创新基金项 目 2 0 0 9 D - 5 0 0 6 0 7 0 1 、青岛市科技发展 指导计划项 目 K J Z D- 1 2 6 5 - j c h 、中央直属 高校科研 专项基金 项 目 1 1 CX 0 5 0 1 1 A 、中国石油大学 华东 研究生创新工程 C X 一 1 2 1 9和 C X 2 0 1 3 0 3 5 资助 通讯联 系人张秀霞 ，女 ，教授 ，博士 ，从事石油污染土壤修复研 究工作 ；E ma i l z h x i u x i a u p c ． e d u ． C D _ 第 1 期 土壤修 复过程中微生物数量 、酶活性与石油 降解率 的关 系 9 5 石油开采 、运输、储存和利用造成的土壤石油 污染 日益严重。 目前 ，土壤石油污染的处理方法 主 要有物理法、化学法以及 生物修复法 ，其 中，生物 修复方法因处理彻底 、费用低而备受关注口 ] 。微生 物能够利用石油烃作为生长所需 的碳源和能源 ，并 在酶的催化下将其水解为甘油 、脂肪酸 ，最终 降解 为 H 0、C O l 引。徐金兰等口 研究表 明，生物修 复 过程中，高效石油降解 菌的投加可加快石油污染物 的降解 ，远远高于只有 土著微生物的 自然状态 的石 油 降解 。 当高效降解菌应用于石油污染 土壤 时，由于营 养物质 、空间以及代谢产物 如表面活性剂 而与 土 著微生物产生协 同或竞争作用 ，直接导致微生物数 量增加 或减 少 ，从 而影 响石 油 降解效 率。张 甲耀 等[ 4 伽研究表明，微生物数量、土壤酶活性均与石油 污染物的降解有一定关系 。笔者在单 因素花盆实验 优化降解条件的基础上 ，在花盆 中投加高效石油 降 解菌 ，模拟原位修复石油污染土壤，研究微生物 细 菌 、真菌和放线菌 数量 、土壤酶活性与石油降解率 之间的相关性 ，为石油污染 土壤 的生物修复提供 理 论 基础 。 1 实验部分 1 ． 1 材料 供试土壤采 自新疆 克拉玛依油 田的重油九区大 坝附近的石油污染土壤 。其 p H值 为 7 ． 2 ～7 ． 4 ，含 水率 质量分数 ，下同 2 2 ． 3 5 ～2 5 ． 2 8 ％，有机 质 质量 分 数 1 2 2～ 1 5 2 g ／ k g ，全 氮 质 量 分 数 1 8～ 2 5 g ／ k g ，有效磷质量分数 1 2 ． 0 ～2 1 ． 6 g ／ k g ，石 油 烃质量分数 4 ． 0 7 ～5 ． 0 3 。实验过程 中，供试 土 壤去除植物残体 以及砾石，过 3 mm筛 ，经过 自然 风干 7 d后使用 。 1 ． 2实验方 法 1 ． 2 ． 1 高效降解菌降解条件 的优化 在恒温恒湿的培养箱 中花盆实验模拟微生物原 位修复 ，将高效降解菌应用于石油污染土壤的修复 。 根据石油降解率对微生物的降解条件进行优化得 出， 最佳接种量为 1 5 9 ／ 6 质量分数 、表面活性剂 吐温 8 0 质量分数为 0 ． 1 、C NP比为 1 0 0 1 01 即有 机质含量与全氮、速效磷的质量分数 比 、翻耕频率 为 1次／ d 、温度 3 7 ℃、含水率在 2 2 ～2 6 。进行 2 8 d的花盆修复 ，每隔 7 d测定 1次土壤的微 生物 数量 、土壤酶活性和石油含量。采用紫外分光 光度 法测 定 土壤石 油含 量 g ] 。 1 ． 2 ． 2 土壤微生物数量的测定 采用稀释平板涂布培养计数法 ，细菌采用 牛肉 膏蛋 白胨琼脂培养基培养计数 ，真菌采用马丁氏培 养基培养计数 ，放线菌采用高氏 1号培养基培养计 数 ，结果 以每 1 g干土所含数量表示L 1 。 1 ． 2 ． 3 土壤酶活性的测定 采用苯酚钠 比色法 测定脲酶活性 ，采用邻 苯三 酚 焦性没食子素 比色法测定多酚氧化酶活性 ，采 用高 锰 酸 钾 滴 定 法 测 定 过 氧 化 氢 酶 活性 ，采 用 2 ， 3 ， 5 一 三苯 基 四氮 唑氯 化 物 TTC 还 原 法测 定 脱 氢 酶活性 ，采用茚三酮比色法L 1 1 _ 测定蛋 白酶活性。 2 结果 与讨 论 2 ． 1 修 复过 程 中土壤 微 生物数 量 的变化 在优化降解条件下 ，对石油污染土壤进行 2 8 d 原位修复，每隔 7 d测定 1次土壤 中微生物总数 包 括细菌 、真菌和放线菌 。由于细菌 、真菌和放线菌 的生长速率、代谢途径以及对石油烃的利用性不同， 导致 在修 复 过程 中微 生 物数 量 增 长 发 生 了变 化 ，实 验 结果列 于 表 1 。 表 1 石油污染土壤修 复过 程中微生物数量的变化 Ta b l e 1 The v ar i e t y of mi c r o or g a ni s m po pu l a t i on qu a nt i t y du r i ng r e me d i a t i o n o f o i l c o nt a mi na t e d s o i l 9 6 石 油学 报 石油加工 第 3 O卷 由表 1可知，在修复初期 ，由于高效石油降解 菌对土壤环境处于适应 阶段 ，微生物数量几乎没有 改变。只有土著微生物修复 的土壤 ，由于土著微生 物数量有限，高浓度的石油污染物对微生物 的生长 与代谢产生抑制作用_ 】 ，因此，微生物数量几乎不 变 ；随着修复的进行 ，高效石油降解菌逐渐适应 了 环境 ，微生物数量激增 ；到 了修复后期 ，由于易降 解的石油组分被快速降解 ，一些难降解的高分子物 质会对微生物产生毒害作用 ，同时由于酸性物质 的积累使得土壤微生物总数增长缓慢 。 由表 1还可知 ，当高效石油降解 菌投加到石油 污染土壤时，由于要适应环境条件且受石油浓度 的 选择性作用 ，使得细菌数量变化不大，此时微生物 总数几乎不变；随着时间的延长 ，适应 了该环境 的 高效降解菌大量繁 殖，利用石油 污染物作为碳源 ， 同时获取适量的 N、P等营养物质 ，细菌数量激增 ； 随着修复的进行 ，由于易被微生物利用 的石油组分 减少 、营养的失衡以及酸性物质 的积累l 1 ，引起部 分细 菌增 长缓 慢或者 死亡 。 土壤 中真菌数量在修复 7 d没有 出现变化 ，表 明该浓度石 油类污染 物质 的存在抑 制 了真 菌 的生 长 】 ；随着修复的进行，真菌数量开始增长，此时 的石油污染物在不断地代谢 和降解条 件下适宜于真 菌的生长，但细菌和放线 菌的对数增 长却对真菌的 生长产生抑制作用 ，因此真菌数量增长缓慢；到了 修复 末期 ，随着 可利 用 碳 源 的减 少 ，石油 中不 易 降 解组 分 如芳香 类 不 断 的积 累 ，真 菌 对芳 香 烃 有 很 强的降解作 用L 1 ，此 时细菌 和放 线菌处 于竞争 状 态 ，这两者的作用刺激了真菌的对数增长。 土壤中放线菌数量在修复 7 d呈现缓慢增长的 趋势；修复时间增至 1 4 d 、2 1 d ，放线菌数量呈现 对数增长，这是因为随着石油污染物的代谢和降解 ， 会选择性地刺激放线菌的生长口 。 ；修复末期 ，由于 微生物生长需要消耗大量 的营养元 素，导致土壤 中 营养供 给不 足 ，微 生物 数量 呈现 下 降的趋 势 。 2 ． 2 修 复过 程 中土壤 酶活 性的变 化 在优化降解条件下，对石油污染土壤进行 2 8 d 原位修复 ，每隔 7 d测定 1次土壤酶活性 ，包括脲 酶、蛋 白酶、脱氢酶 、过氧化氢酶以及多酚氧化酶 ， 实验结 果示 于 图 1 。 由图 1可知，修复初始 阶段 ，土壤脲酶活性逐 渐增加 ，修复 1 4 d后 ，脲酶活性 的增长速率逐渐下 降，修复后期脲酶活性的增 长速率又有所 升高 。石 油 的部分 组成 物质 在 初 始 阶段 可 以被 土壤 中与 脲 酶 活性有关的微生物利用口 ，微生物总数增多，因此 脲 酶活性 增 强 ，与 陈亮 等口 。 关 于脲 酶 活 性 与微 生 物 总数关系的结果一致 ；修复 1 4 d后 ，由于可利用碳 源的减少 ，以及营养物质的缺乏导致微生物总数的 减少，土壤脲酶活性有所下降，表明脲 酶对环境 中 的营养物质变化较为敏感_ 1 ；随着石油污染物的不 断降解 ，土壤中微生物总数和种类不断增多 ，从而 使 得脲 酶活 性有所 增 强口 。 图 1修复过程中土壤酶活性 随时间的变化 Fi g ． 1 Th e v a r i e t y o f e n z y m e a c t i v i t y wi t h t i m e d ur i ng r e m e di a t i o n o f oi l c o nt a m i na t e d s o i l 1 Po l y p h e n o l ox i d a s e ； 2 Ca t a l a s e； 3Ur e a s e； 4Pr o t e a s e ； 5 De h y d r o g e n a s e 由图 1 还 可 知 ，在 修 复初 始 阶 段 ，土 壤 蛋 白酶 的活性几 乎没 有 变 化 ，随 着修 复 的进 行 ，蛋 白酶 活 性略有变化，但变化幅度不大。土壤蛋 白酶活性的 增加可能是因为土壤 中有效氮素为微生物提供营养 ， 使得微生物总数增多，但变化不明显。 在修复初始 阶段 ，土壤脱氢酶活性 有所增加 ； 随着修复的进行 ，活性变化反而不 明显 ；到 了修复 后期 ，活性几乎无变化 。脱氢酶在生物修 复的初始 阶段作用非常显著 ，它可以活化有机物 中的氢原子， 使石油污染物发生氧化 ，同时也 由于高效 降解菌 的 添加使得微生物总数有所增加 ，从而导致 土壤脱氢 酶 活性 增加 ，与 王靖等 l_ 2 关 于微 生 物总 数 与 土壤 脱 氢酶活性的结论具有一致性 。随着修复 的进行，易 降解的石油类物质减少 ，微生物 总数也 随之下降 ， 因此脱氢酶活性增加缓慢 。 随着修复的进行 ，土壤过氧化氢酶活性有较 大 的增长趋势 ，到 了修复后期 ，酶活性 的增长速率开 始下降，但仍然呈现增强的趋势。过氧化氢酶活性 可以反映土壤除去呼吸过程 中产生 的过氧化氢的能 H m 呕 第 1 期 土壤修 复过程中微生物数量 、酶活性与石油降解率 的关系 9 7 力 ，若过氧化氢一直积累却始终得不到分解 ，将会 对土壤 中的微生物产生毒害作用。在修复初始阶段 ， 一 定浓度的石油污染物可 以作为底物碳源 ，被与过 氧化氢酶有关的土壤微生物利用，从而使酶活性有 所增强，过氧化氢得到降解 ，此时，土壤中微生物 总数有所增加 ，从而使得过氧化氢酶活性增强 ；随 着修复的进行 ，土壤 中可利用 的碳源减少 ，使得 与 这种酶相关的微生物的数量稍有减少，从而使过氧 化氢酶活性的增长速率下降。 在修复初始阶段，土壤多酚氧化酶活性有所增 加 ；随着修复的进行 ，酶活性增加的速率变大 ；到 了修复后期 ，酶活性增长 的速率有所下 降，但始终 呈现增强的趋势。多酚氧化酶是石油氧化分解过程 中具 有重 要功 能 的一类 酶 引，其 活 性 与 土壤 中酚 的 含量成正相关 。在石油污染土壤 的生物修复过程中， 会产生多种酚类物质 ，从而刺激微生物产生多酚氧 化酶 ，提高了土壤 中多酚氧化酶 的活性。在修复初 期 ，一定浓度 的石油作为底物被与多酚氧化酶相关 的微生物所利用[ 1 ，从而促进石油的降解 ，使得酶 活性 有所 增 强 ，酶活 性 的增 强 在 一定 程 度 上 是 微 生 物总数增多的表 现；随着修 复的进行 ，多酚氧化酶 活性增加 的速率加快 ，是 因为在修复过程 中不断产 生 酚类 物 质 ，刺 激 微 生 物 产 生 大 量 的 多 酚 氧化 酶 ， 而且随着石油污染物 的降解 ，削弱了高浓度石油污 染物对多酚氧化酶活性的抑制作用 ，从 而使得酶活 性有所增强 ；到 了修复末期，由于土壤 中多酚类有 毒物质 的积累l_ 2 朝 影响到了微生物 的数量 ，从 而使酶 活性增长的速率有所下降。 2 ． 3土壤修复过程中石油降解率的变化 在优化降解条件下 ，对石油污染 土壤进行 2 8 d 原位修复 ，每隔 7 d测定 1次石油降解率 ，实验结 果 示 于 图 2 。 由图 2可知 ，在修复初始阶段 ，投加高效 降解 菌的土壤的石油 降解率没有明显的提高 ；随着修复 的进行 ，石油降解速率加快 ；到了修复末期 ，石油 降解速率有所下降 ，但仍然呈现增 大的趋势 。在土 壤修复初始阶段 ，高效降解菌首先要适应环境 ，而 且接种数量 有限，使得 石油降解率没 有明显提高 ； 此时微生物总数没有快速增加 ，因为在这一阶段 高 效降解 菌比较容易利用石油污染物作为能源和碳源 ， 在降解过程中发挥主导作用 ，从而抑制土著微生物 的活性和生物可利用性I 2 。随着修复 的进行 ，一定 浓度范围的石油污染物可以促进土壤微生物的生长 增殖 ；此时微生物总数急剧增加 ，微生物 的增长速 率最快，最有利于石油污染物的降解 。到了修复末 期，由于可利用碳源减少，以及有毒有害物质积累， 使得微生物总数有所减少，石油降解速率逐渐下降。 图 2土壤修复过程 中石油 降解率 随时间的变化 Fi g． 2 Th e v a r i e t y o f o i l de g r a d a t i o n r a t e wi t h t i me d u r i ng r e me d i a t i o n o f o i l c o nt a mi na t e d s o i l 1 H i g h l y e f f i c i e n t p e t r o l e u m d e gr a d i n g b a c t e r i a； 2I n d i g e n o u s ba c t e r i a 2 ． 4土壤修 复 过程 中微 生物数 量 、土壤 酶活性 和石 油 降解 率 的相关 性分 析 2 ． 4 ． 1 微生物数量与石油降解率的相关性 根据修复过程中微生物数量和石油 降解率的变 化 表 1和图 2 ，采用 S P S S 1 8 ． 0分析软件建立微生 物 细菌、真菌和放线菌 数量和石油 降解率之间的 相关性 ，结果列于表 2 。 表 2 土壤修 复过程中石油降解 率和微生物 数量 的相关性分析 Ta bl e 2 Co r r e l a t i o n a n a l y s i s b e t we e n oi l d e g r a da t i o n r at e a nd mi c r o b i a l po pu l a t i o ns du r i ng r e me di a t i o n o f oi l c o nt a mi na t e d s o i l 由表 2可知 ，微生物总数变化和石油降解率之 间相关性非 常显著 ，相关性系数为 0 ． 9 7 7 。由此可 知 ，微生物总数越多 ，越有利于石油污染物的降解 ， 与刘敬奇等 的研究结果一致 。 细菌数量和石油 降解率之 间相关 性非常显著 ， 、 ∞ g a 0 鼍鑫 0 一 0 9 8 石油学报 石油加工 第 3 O卷 相关性系数为 0 ． 9 8 9 ，细菌数 量越多越有利于石油 污染物的降解 。S a t h i s h k u ma r 等[ 2 研究表明，细菌 比真菌和放线菌更能有效地降解石油 ，且土壤 中本 身存在的细菌 由于能够利用范围很宽 的石 油污染 ， 因此 随着细菌数量的激增 ，石油降解率显著增加 。 真菌和放线菌数量与石油降解率之间相关性不 显著，可能是因为真菌和放线菌在土壤 中的数量有 限，也可能是因为真菌和放线菌降解石油污染物 中 的难降解组分，从而对石油降解率的贡献不大 。 2 ． 4 ． 2 土壤 酶 活性 与石油 降解 率 的相关性 采用 S P S S 1 8 ． 0分析软件建立 土壤酶活性 和石 油降解率之间的相关性 ，结果列于表 3 。 表 3土壤修 复过 程中石油 降解 率和土壤 酶 活性的相关性分析 Tab l e 3 Co r r e l a t i o n a n a l y s i s b e t we e n o i l d e g r a da t i on r a t e a n d s o i l e n z y m e a c t i v i t y du r i ng r e m e d i a t i o n o f o i l c o nt a mi na t e d s o i l 1 At 0 ． 01 l e v e l d o u b l e s i d e s i g n i f i c a n t c o r r e l a t i o n； 2 At 0 ．0 5 l e v e l d o u b l e s i d e s i g nif i c a n t c o r r e l a t i o n 由表 3 可知 ，脲酶活性、脱氢酶活性和多酚氧 化酶活性与石油降解率之间 的相关性非常显著 ，相 关性系数大于 0 ． 9 6 。土壤 中一定浓度 的石油可以作 为碳源被土壤中与脲酶活性 、过氧化氢酶活性 和多 酚氧化酶活性有关的微生物所利用 见 2 ． 3节 ，且 随着土壤 中可利用碳 源的减少 ，使得与这些酶相关 的微生物的数量相应减 少，表现为酶 活性 的下降 ， 最终导致石油降解率的下降。 由表 3还可知 ，蛋 白酶和脱氢酶活性与石油 降 解率之间的相关性显著 ，相关 性系数分别为 0 ． 9 4 4 和 0 ． 9 3 4 。蛋 白酶和脱氢酶在石油污染土壤修复过 程 中酶活性变化不显著 见 2 ． 3节 可能与这些酶相 关 的微生物数量变化不显著有关 。 3 结 论 1 石油污染 土壤 中微生 物总数 、细菌数量 、 脲酶活性 、过氧化氢酶活性和多酚氧化酶活性与石 油降解率的相关性非常显著 ，且呈正相关关系 ；因 此在修复时应致力于提高微生物总数、细菌总数 以 及增强脲酶 、过氧化氢酶和多酚氧化酶活性 ，以达 到高石油降解率 。 2 蛋白酶和脱氢酶活性变化与石油降解率呈 显著正相关关系，因此在修复石油污染土壤时可以 提高蛋白酶和脱氢酶活性 ，以达到提高石油降解率 的 目的 。 3 真菌数量和放线菌数量变化与石油降解率 的相 关性 不显 著 。 参 考 文 献 E z ]余 萃 ， 廖先清 ，黄敏．石油污染 土壤 的微 生物修 复研究 进展[ J ] ．湖北农业 科学 ， 2 0 0 9 ， 4 8 5 1 2 6 0 1 2 6 3 ． Y u Cu i ，LI AO Xi a n q i n g ，HUANG M i n ． Re s e a r c h p r o g r e s s o n mi c r obi a l r e me d i a t i o n o f p e t r ol e um c on t a mi n a t e d s o i l E J ] ．Hu b e i A g r i c u l t u r a l S c i e n c e s ，2 0 0 9 ，4 8 5 1 2 6 0 1 26 3． [ 2 ]金志刚．污染物 生物 降解[ M] ．上 海 华东理工 大学 出 版社 ，1 9 9 7 1 5 4 1 6 0 ． [ 3 ]徐金兰 ， 黄廷林 ， 唐 智新 ，等．高效石油 降解菌 的筛 选 及石油污染土壤生物修 复特性 的研究 E J ] ．环境 科学 学 报 ，2 0 0 7 ，2 7 4 6 2 2 6 2 8 ． XU J i n l a n ，HUA NG Ti n g l i n。TANG Z h i x i n， e t a 1 ． I s o l a t i o n o f p e t r o l e u m d e g r a d a t i o n b a c t e r i a a n d i t s a p p l i c a t i o n t o b i o r e me d i a t i o n o f p e t r o l e u m c o n t a mi n a t e d s o i l[ J ] ． A c t a S c i e n t i a e Ci r c u ms t a n t i a e ，2 0 0 7 ，2 7 4 6 2 2 6 2 8 ． [ 4 ]张 甲耀 ，郑金秀 ，彭祺 ，等．优 势降解 菌群生物 强化 修 复石油污染土壤E J ] ．农业环境科学学报 ，2 0 0 6 ， 2 5 5 1 2 1 2 - 1 2 1 6 ． ZHANG J i a y a o ， ZHENG J i n x i u，PE NG Qi ，e t a 1 ．Bi o r e me d i a t i o n o f o i l c o n t a mi n a t e d s o i l b i o a u g m e n t e d wi t h c o n s o r t i u m b a c t e r i a[ J ] ． J o u r n a l o f Agr o - Envi r on me nt Sc i e n c e，20 06，2 5 5 1 21 2 - 1 21 6． E 5 ]刘敬奇 ，王红旗 ， 齐永强．油污土壤 中微生 物数量 变化 与原 油降解速 率关 系 的实 验研究 [ J ] ．环境 污染治 理技 术 与设 备 ，2 0 0 4 ，5 1 3 6 3 9 ． L I U J i n g q i ，WAN G Ho n g q i ，QI Yo n g q i a n g ．Th e s t u d y o n a mo u n t v a r i a t i o n o f mi c r o b e s a n d i t s r e l a t i o n s h i p wi t h t h e d e g r a d a t i o n o f c r u d e o i l i n o i l p o l l u t e d s o i l[ J ] ． Te c h n i q u e s a n d Eq u i p me n t f o r En v i r o n me n t a l Po l l u t i o n C o n t r o l ，2 0 0 4，5 1 3 6 3 9 ． E 6 ]张晶 ， 张惠文 ，张勤 ，等．长期石油 污水灌 溉对东 北旱 田土壤微生物生物量及 土壤酶 活性 的影 响 [ J ] ．中国生 态农 业 学 报 ，2 0 0 8 ，1 6 1 6 7 7 0 ． Z HANG J i n g ， Z HANG Hu i we n ，Z HANG Qi n，e t a 1 ．I mp a c t o f l o n g t i me i r r i g a t i o n o f p e t r o l e u m wa s t e wa t e r o n g l e b e 第 1 期 土壤修复过程 中微生物数量 、酶活性与石油 降解率 的关 系 9 9 mi c r o b i a l b i o ma s s a n d s o i l e n z y me a c t i v i t i e s i n n o r t h e a s t C h i n a [ J ] ．C h i n e s e J o u r n a l o f E c o Ag r i c u l t u r e ， 2 0 0 8 ， 1 6 1 6 7 - 7 0 ． E 7 ]靳治 国，施婉君 ，高扬 ， 等．不 同土地利 用方式 下 土壤 重金属分布规律及其 生物活性变化E J ] ．水土保 持学报 ， 2 0 0 9 ，2 3 3 7 4 7 7 ． J I N Z h i g u o ，S HI W a n j u n ，GAO Ya n g，e t a 1 ．Di s t r i b u t i o n o f h e a v y me t a l s a n d c h a n g e s o f s o i l b i o l o g i c a l a c t i v i t y u n d e r d i f f e r e n t l a n d u s e p a t t e r n s [ J ] ．J o u r n a l o f S o i l a n d Wa t e r C o n s e r v a t i o n ，2 0 0 9 ，2 3 3 7 4 7 7 ． [ 8 ]董艳 ，董坤 ， 郑 毅 ，等．种植 年 限和种植 模式对 设施 土 壤微生物 区系和酶活性的影响[ J ] ．农业环境 科学学 报 ， 2 0 0 9 ，2 8 3 5 2 7 5 3 2 ． DONG Ya n， DONG Ku n， ZHENG Yi ， e t a 1 ． S o i l mi c r o b i a l c o mmu n i t y a n d e n z y me a c t i v i t i e s i n g r e e n h o u s e wi t h d i f f e r e n t c u l t i v a t i o n y e a r s a n d p l a n t i n g s y s t e m[ J ] ． J o u r n a l o f A g r o - En v i r o n me n t S c i e n c e ，2 0 0 9，2 8 3 5 2 7 5 3 2 ． [ 9 ]中 国 标 准 出 版 社 总 编 室． 中 国 国 家 标 准 汇 编 2 5 2 G B 1 7 3 6 5 1 7 3 5 [ M] ．北京 中 国标准出版社 ，1 9 9 9 ． [ 1 0 ]李阜棣 ， 喻子牛 ， 何绍 江．农业微生物学实验技术 [ M] ． 北京 中国农业 出版社 ，1 9 9 6 3 0 5 3 0 7 ． [ 1 1 ]关 松 荫． 土壤 酶 及 其 研 究 法 [ M] ．北 京 农 业 出 版 社 ，1 9 8 6 ． [ 1 2 ]杨雪莲 ， 李凤梅 ，刘婉 婷 ，等．高效石 油降解 菌 的筛 选 及其 降解 特性[ J ] ．农 业环境科学报 ， 2 0 0 8 ， 2 7 1 2 3 0 2 3 3 ． YANG Xu e l i a n，LI Fe n g me i ，LI