UPLC.MS／MS法测定7类化妆品中4一氨基联苯.pdf

第 2 5卷第 9期 2 0 1 3年 9月 化 学 研 究 与 应 用 C h e mi c a l Re s e a r c h a n d Ap p l i c a t i o n Vo 1 ． 2 5， No ． 9 S e p ． ， 2 01 3 文章编号 1 0 0 4 1 6 5 6 2 0 1 3 0 9 1 3 1 4 - 0 5 U P L C ． MS ／ MS法测定 7类化妆 品中 4 一 氨基联苯 戴 明 福建省产品质量检验研究院国家加工食品质量监督检验中心， 福建福州3 5 0 0 0 2 摘要 建立了超高效液相色谱． 串联质谱 U P L C MS ／ MS 检测化妆品中4 一 氨基联苯的方法。化妆品样品经溶 剂超声提取、 净化 液液萃取或固相萃取 ， 氮气吹至近干并定容后， 通过高效液相色谱- 串联四极杆质谱仪检 测。分离柱为 Wa t e r s A c q u i t y B E H C 1 8柱 1 ． 7 I x m， 2 ． 1 m m 1 0 0 m m ； 流动相为0 ． 3 ％甲酸水溶液- 乙腈 ； 流速 0 ． 5 mL m i n ～。7种不同基质样品中4 ． 氨基联苯的检测限均小于 1 ． 0 n g g ～。7种不同基质样品中4 - 氨基联 苯的回收率为 8 5 ． 3 ％ 一1 1 1 ． 2 ％， 相对标准偏差 R S D 为 0 ． 9 3 ％ 4 ． 1 l ％ n 3 ， 在 2 ． 5 n g mL - ～2 5 0 n g m L 浓度范围内呈良好的线性关系， 线性回归系数 r 均大于 0 ． 9 9 9 。 关键词 超高效液相色谱一 串联质谱法 ； 化妆品； 4 - 氨基联苯 中图分类号 0 6 5 7 ． 7 文献标志码 A De t e r mi na t i o n o f 4- a mi n o bi p he ny l i n c o s m e t i c s by ul t r a pe r f o r m a n c e l i q ui d c hr o ma t o g r a ph y- t a nd e m ma s s s p e c t r o m e t r y DAI M i ng C h i n a N a t i o n al Q u ali ty S u p e r v i s i o n a n d T e s t i n g C e n t e r f o r P r o c e s s e d F o o d ， F u j i a n I n s pec t i o n a n d R e s e a r c h I n s t i t u t e for P r o d u c t Q u al i t y ， F u z h o u 3 5 0 0 0 ， C h i n a Ab s t r a c t A s i mp l e a n d r a p i d me t h od w a s d e v e l o p e d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f 4 -a mi n o d i p h e n y l i n c o s me t i c s b y u l t r a p e rfo rm a n c e l i q - u i d c h r o ma t o g r a p h y mode m ma s s s p e c t r o me t r i c me t h o d ． T h e c o s me t i c s a mp l e s we r e e x t r a c t e d b y d i f f e r e n t s o l v e n t s w i t h u h r a s o n i c a - t i o n a n d p u r ifie d b y l i q u i d - l i q u i d e x t r a c t i o n o r s o l i d p h a s e e x t r a c t i o n ． M t e r t h e c h roma t o g r a p h i c s e p a r a t i o n o n W a t e r s Ac q u i t y B E H C 1 8 1 ． 7 t x m， 2 ． 1 ra m 1 0 0 ram c o l u m n b y i s o e r a t i c e l u t i o n wit h 0 ． 3 ％f o rmi c aci d a c e t o n i t r i l e ， the anal y s i s w a s c a r r i e d o u t b y U P - L C MS ／ MS ． T h e l i n e a r r a n g e o f 4 - a m i n o b i p h e n y l i n s e v e n c o s m e t i c m a t ri x w e l q 2 ． 5 n g m L 一～ 2 5 O n g m L r 2 O ． 9 9 a n d t I l e d e t e c t i o n l i mi t s we r e l e s s t h a n 1 ． 0 n g g ～． T h e l c o v e r i e s w e r e r a n g e d f r o m 8 5 ． 3 ％ ～1 1 1 ． 2 ％ ． a n d the r e l a t i v e s t a n d a r d d e v i a t i o n s we r e 0 ． 9 3 ％ ～4 ． 1 1 ％ n3 ． Ke y wo r d s UP L C - -MS ／ MS； c o s me t i c s ； 4 - a mi n o b i p h e n y l 4 ． 氨基联苯作为一种重要 的染料芳香胺 中间 体， 对人体的致畸、 致癌、 致突变的危害已为人们 所熟知 。2 0 0 7年卫生部颁布的 化妆品卫生规 范 已将 4 。 氨基联苯及其盐列为 2 8 8号禁用组 分 引。由于化妆品样品基质复杂， 基体干扰大， 现有检测方 法无法 满足其要 求 ， 因而有 必要建立 化妆品中的4 一 氨基联苯检测方法。目前芳香胺的 定量检测方法主要有薄层色谱法 T L C 、 气相色 谱法 G C 、 电泳 法 E C 、 高 效 液 相 色 谱 法 H P L C 、 气相色谱一 质谱联用法 G C MS 、 液相色 收稿 日期 2 0 1 3 - 0 2 1 9； 修回 日期 2 0 1 3 - 0 5 - 2 4 基金项目 福建省自然科学基金项目 2 0 0 9 J 0 5 1 1 5 资助 联系人简介 戴明 1 9 7 7 一 ， 男 ， 博士 ， 高级工程师 ， 主要从事食 品及 化妆 品污染物检测。E ma il d a i m i n g _ f c i i 1 6 3 ． C O I n 第 9期 戴明 U P L C MS ／ MS法测定 7类化妆品 中4 ． 氨基联苯 1 3 1 5 谱一 质谱联用法 H P L C - M S 等 。本文利用超高 效液相色谱 U P L C 分析时间短、 检测效率高、 溶 剂消耗少的特点和质谱法 M S 高特异性、 高灵敏 度 的特点 ， 通过对样 品前处理 条件 以及 色谱 检 测条件的优化 ， 建立化妆 品中 4 ． 氨基 联苯 的检测 方法。方法快速、 简便、 准确、 灵敏， 为化妆品中 4 ． 氨基联苯 的快速检验 和定性 定量分析 、 标准方法 的制定提供了技术支持 。 1 实验部分 1 ． 1 仪器与试剂 A g i l e n t 1 2 9 0超高效 液 相色谱 仪 ， A g i l e n t 6 4 6 0 Q Q Q串联四极杆质谱仪 美国安捷伦公司 ； 高速 冷冻离心机 美 国贝克曼公 司， A v a n t i J - E ； 1 2管 固相萃取装置 美国S u p e l c o 公司 ； 超声波振荡器 上海生析超声仪器公司 ； 氮吹仪 北京 P o l y t e c h 公 司 ； Mi l l i - Q超纯水纯 化系统 美 国 Mi l l i p o r e公 司 ； 涡旋混合器 江苏健康医药公司 。 所用试剂 除特别标注 外均 为分析纯试剂 ， 水 为超纯水； 甲醇、 乙腈 色谱纯， 山东禹王实业有限 公 司化 工 分 公 司 ； 4 ． 氨 基 联 苯 标 准 品 纯 度 9 9 ％ ， A c r o s o r g a n i c s ， 美 国 。氘代 试剂 4 - 氨 基联 苯一 D 9标准品 纯度 9 9 ％ ， A c r o s o r g a n i c s ， 美 国 。 1 ． 2 样品提取与净化 1 ． 2 ． 1 化 妆水、 面霜 、 粉底 类化妆 品 称取样 品 0 ． 2 g 精确到 0 ． 0 1 g ， 置于 1 0 mL具塞塑料离心 管 中， 加入 1 m L 浓度为 1 0 0 n g m L 氘同位素标记的 4 一 氨基联苯 ， 再加入 3 m L氯化钠饱 和溶 液 ， 于涡旋 混合器上使样品分散， 加入 3 m L乙腈， 充分涡旋， 并超声提取 3 0 ra i n， 1 0 0 0 0 r mi n 离 心 1 0 m i n ， 静置 分层 ， 吸出上层清液于另一 l O m L具塞塑料离心管 中， 下层氯化钠溶液用 3 m L乙腈重复提取步骤一 次， 合并两次乙腈提取液 ， 往提取液中加入正己烷 2 m L ， 涡旋离心， 分层， 弃去上层正己烷溶液， 再在 乙腈层加入正己烷 2 m L ， 涡旋离心， 分层， 弃去上 层正己烷溶液 ， 下层 乙腈溶液转移至另一 l O mL玻 璃刻度试管中， 用氮气吹至近干， 并用 3 0 ％甲醇水 溶液重新溶解、 定容至 2 m L ， 并经 0 ． 2 Ix m滤膜过 滤后作为测定液上机测定。 1 ． 2 ． 2 洗面奶、 沐浴液类化 妆品称取样品 0 ． 2 g 精确到 0 ． 0 1 g ， 置 于 1 0 mL具 塞塑料 离心管 中， 加入 1 m L 浓度为 1 0 0 n g m L 氘同位素标记的4 ． 氨基联苯 ， 再加入 3 mL氯化钠饱和溶液 ， 于涡旋混 合器上使样品分散， 加入 3 m L乙醚， 充分涡旋 ， 并 超声提取 3 0 m i n ， 1 0 0 0 0 r m i n 离心 1 0 m i n ， 静置分 层 ， 吸出上层清液于另一 1 0 mL具塞塑料 离心管 中， 下层氯化钠溶液用 3 m E乙醚重复提取步骤一 次， 合并两次乙醚提取液， 用氮气吹至近干， 并用 3 0 ％甲醇水溶液 2 m L重新溶解 ， 再加入 8 mL纯水 稀释， O a s i s H L B固相萃取小柱， 接上 固相萃取装 置 ， 小柱预先用 l O m L甲醇、 1 0 m L水进行 活化 、 平 衡。将待净化的样品清液倒入固相萃取小柱， 待 样 品溶 液 自然 流尽 后 ， 依 次用 1 0 mL纯 水、 5 mL 1 0 ％甲醇溶液淋洗小柱； 待淋洗液 自然流尽后， 用 吸球吹出小柱中的残留液 ， 并用 1 0 mL新配 5 ％氨 水甲醇溶液洗脱固相萃取小柱， 并收集洗脱液， 并 经氮气吹至近干， 并用 3 0 ％甲醇水溶液重新溶解、 定容至 2 m L， 并经 0 ． 2 m滤膜过滤后作为测定液 上机测定 。 1 ． 2 ． 3 指甲油、 口红 称取样品 0 ． 2 g 精确到 0 ． 0 1 g ， 置于 1 0 m L具塞塑料离心管中， 加入 1 m L 浓度为 l O 0 n g - m L 氘同位素标记 的 4 一 氨基联 苯 ， 再加入 3 m L乙腈 ， 于涡旋混合器上使样品分散溶 解， 充分涡旋， 并超声提取 3 0 m i n ， l O 0 0 0 r m i n 离 心 1 0 m i n ， 取上层清液于另一 l O m L具塞塑料离心 管中， 下层样品残渣再用3 m L乙腈重复提取步骤 一 次， 合并两次乙腈提取液， 往提取液中加入正己 烷 2 m L ， 涡旋离心， 静置分层分层， 弃去上层正己 烷溶液 ， 再在乙腈层加入正 己烷 2 m L， 涡旋离心 ， 静置分层分层 ， 弃去上层正己烷溶液 ， 下层乙腈溶 液转移至另一 1 0 m L玻璃刻度试管中， 用氮气吹至 近干， 并用 3 0 ％ 甲醇水溶液重新溶解、 定容至 2 mL ， 并经 0 ． 2 m滤膜过滤后作 为测定液上机测 定 。 1 ． 3 色谱与质谱条件 色谱条件 Wa t e r s A c q u i t y U P L C T M B E H C 1 8 色谱柱 2 ． 1 m m 1 0 0 m m， 1 ． 7 m ； 柱温 4 0 a I ； 流动相 A为 0 ． 3 ％甲酸水溶液 ， B为 乙腈 ； 洗脱程 序 等 度 ； 7 5 ％ A2 5 ％ B t ， ； 流 速 0 ． 5 m L ra i n ～； 进样量 2 tr L ； 质谱条件 电喷雾离 子源 E S I ； 正离子扫描 ； 雾化气 氮气 ； 雾化气压力 4 0 p s i ； 离子喷雾电压 4 0 0 0 V； 干燥气温度 3 5 0℃； 干燥气流速 1 0 L ra in ～； 分辨率 Q 1 u n it Q 3 U n i t ． 。 1 3 1 6 化 学 研 究 与 应 用 第 2 5卷 2结果与讨 论 2 ． 1 前处理条件的优化 根据 目标组分 的化学 结构和性质 ， 在研究 过 程中分别采用液一 液萃取、 固相萃取等方法对不同 化妆品基质中 4 一 氨基联苯进行净化。实验结果表 明化妆水、 面霜、 粉底类、 指 甲油 及唇膏等化 妆 品 样品经过乙腈萃取， 并经正己烷净化， 基体无明显 干扰。而洗面奶及沐浴液样品 中由于存在较多 的 表面活性剂 ， 样品经乙醚提取后存在较大干扰 ， 样 品回收率较低 ， 为有效消除样 品的基体干扰 ， 本研 究通过 H L B固相萃取小柱进行了净化 ， 实验结果 表明经固相萃取净化后， 样品的测定无明显基体 的干扰存在 ， 取得满意的效果。 2 ． 2 色谱与质谱条件的优化 在考虑色谱 柱的耐酸性能基础 上 ， 本 文实验 了纯 水 、 0 ． 1 ％ 甲 酸、 0 ． 2 ％ 甲 酸、 0 ． 3 ％ 甲 酸 和 0 ． 4 ％ 甲酸与 乙腈作为流动相 的分离效果 ， 实验发 现 0 ． 3 ％ 甲酸一 乙腈 作为 流动相 时 获得满 意 的 结 果 。同时在流动相 中加入 甲酸也有利于提高样 品 的离子化效率和抑制胺类化合物的色谱峰拖尾现 象。本方法采用了最新的超高效液相色谱技术和 1 ． 7 t i m粒径的色谱柱， 具有极高的分离效率， 化妆 品样品在4 ra i n内即完全分离， 4 ． 氨基联苯及其内 标 4 - 氨基联苯一 D 9的保 留时间分别 为 t ． 1 3 9 mi n 和 1 ． 0 6 9 m i n 。4 一 氨基联苯与 4 ． 氨基联苯一 D 9的多 反应监测 MR M 分 析 总离子流 图见 图 1 。配 制 5 0 0 ri g mL 一4 一 氨基联苯 及其 内标 4 ． 氨基联 苯． D 9 的甲醇溶液 ， 首先作一级全 扫描 ， 扫描结果在 E S I 模式下 4 一 氨基联苯及其内标均有较强的分子 离 子 峰 ， 其 母 离 子 分 别 为 m ／ z 1 7 0 ． 1和 m ／ z 1 7 9 ． 0 ， 并进而优化了其质谱参数， 获得较高的灵 敏度。再对 以上母离 子进 行子离子扫描 ， 通过 优 化碰撞能量等参数获得两种物质的子离子扫描质 谱图， 4 一 氨基联苯及其内标物的定量和定性子离子 及相应的质谱参数如表 1 。 图1 4 ． 氨基联苯与4 - 氨基联苯一 D 9的多反应监测 MR M 分析总离子流图 F i g ． 1 MRM C h r o ma t o g r a ms o f 4 - a mi n o - b i p h e n y l a n d i n t e r a l s t a n d a a r d 4 - a mi n o d i p h e n y - D 9 表 1 4 氨基联苯及其内标物的保留时间、 监测离子对、 源内裂解电压、 碰撞气能量 T a b l e 1 MS p a r a me t e r s f o r 4 - a mi n o - b i p h e n y l a n d 4 一 a mi n o d i p h e n y - D 9 定量离子 2 ． 3 方法学验证 2 ． 3 ． 1 方法的特异性取化妆水、 面霜、 粉底、 洗 面奶 、 沐浴液 、 指 甲油、 唇膏等 7种 空 白样 品基质 ， 按“ 1 ． 2样品的提取与净化” 方法操作， 获得空 白 样品的色谱图； 取 4 ． 氨基联苯及其 内标物纯样标 准混合溶液， 获得标准品的色谱图； 将一定浓度的 4 ， 氨基联苯及其内标物添加入空白化妆品样品， 依 同法操作 ， 得相应的色谱 图， 研究比较表明， 样品 基质对 目标组分无显著干扰。 2 ． 3 ． 2 线性与检 测限分别取 化妆水 、 面霜、 粉 底、 洗面奶、 沐浴液、 指甲油、 唇膏等 7种空 白基 质 ， 经过 “ 1 ． 2样品提取与净化” 处理后 ， 氮吹浓缩 第 9期 戴明 U P L C ． MS ／ MS法测定 7类化妆品 中4 ． 氨基联苯 1 3 1 7 至干 ， 加人适量标准溶液与内标溶 液 ， 并用定容至 2 mL ， 得到 2 5 0 n g mL ～、 1 2 5 n g mL ～、 6 2 ． 5 n g m L ～、 2 5 n g m L ～、 1 2 ． 5 n g m L ～、 2 ． 5 n g mL 的空 白基 质 加标标准溶液。取 2 进样， 以样品峰面积与内 标峰面积的比值为纵坐标， 样品浓度比为横坐标， 得到 目标物在不 同基质 中的标 准 曲线 ， r 2均大 于 0 ． 9 9 9 ， 线性范 围为 2 ． 5 n g mL ～～ 2 5 0 n g m L ～。 分别取化妆水 、 面 霜、 粉 底、 洗面奶 、 沐浴 液 、 指甲油、 唇膏等 7种空 白基质 ， 经过 “ 1 ． 2样品提取 与净化 ” 处理后 ， 氮吹浓缩至干 ， 加入适量标准溶 液与 内标溶液制成 2 ． 5 n g mL 的空 白基质加标 混合试样， 进样量为 2 tx L 。以信噪比为 3 倍时的 溶液浓度为定量限 L O D ， 以信 噪比为 1 0倍时的 溶液浓度为定量 限 L O Q ， 计算表 明 4 ． 氨基联 苯 的最低检测 限和定量 限 L O Q 均 低于 1 ． 0 n g g 和 3 ． 3 n g g ～。 2 ． 3 ． 3 回收率选 取化 妆水 、 面霜、 粉 底、 洗 面 奶 、 沐浴液 、 指 甲油和唇膏共计 7类样 品进行标 准 添加试验 ， 所选 样 品经检 测均 不含上 述分 析物 。 每个添加量做 3个平行试验 ， 试验结果见表 2 。 表2 不同化妆品中4 - 氨基联苯的加标回收率 n 3 T a b l e 2 T h e r e c o v e r y o f 4 一 a m i n o b i p h e n y l f o r d i ff e r e n t c o s m e t i c s a mp l e s n 3 2 ． 3 ． 4 精密度按 “ 线性与检 出限” 项 下方法分 别配制 4 一 氨基联苯在不同化妆品基质 中低、 高两 个浓度 分别为5 0 n g g 与 1 0 0 n g g 的质控样 品 Q C ， 每一浓度分析 6次， 连续测定三天。从 而求得本测定方法的精密度 表 3 。 表 3 不同化妆品中4 - 氨基联苯的精密度 n 6 T abl e 3 Th e p r e c i s i o n o f 4 一 a mi n o b i p h e n y l for d i ff e r e n t c o s m e t i c s n 6 2 ． 4 实际样 品检测 本研究选择化妆水、 面霜、 粉底、 洗面奶、 沐浴 液、 指甲油及唇膏等 7类共计 5 0个产品， 按前述 方法进行 检测 ， 4 一 氨基联 苯含量 均低于方法检 测 限。 1 3 1 8 化 学 研 究 与 应 用 第 2 5卷 参考文献 [ 1 ] K a d l u b a r F F ， B u ff e r M A， K a d e r l i k K R， e t a l ， P o l y mo r - p h i s ms f o r a r o ma t i c a mi n e me t a b o l i s m i n h u ma n s r e l e v a n c e for h u ma n c a r c i n o g e n e s i s [ J ] ． E n v i r o n H e a l t h P e r - s p e c t ， 1 9 9 2， 9 8 6 9 - 7 4． [ 2 ] 阿阳． 纺织品禁用偶氮染料的检测[ J ] ． 纺织科技进展， 2 0 0 7， 6 7 - 1 0． [ 3 ] 化妆品卫生规范[ M] ． 北京 中华人民共和国卫生部， 2 00 7． [ 4] T h e C o s me t i c s D i r e c t i v e o f t h e E u r o p e a n U n i o n ． U p d a t e v e r s i o n - 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