加速溶剂萃取技术提取海洋沉积物中游离态脂肪酸的方法研究_李小琳(1).pdf

2014 年 12 月 December 2014 岩矿测试 ROCK AND MINERAL ANALYSIS Vol． 33，No． 6 885 ～891 收稿日期 2014 －02 －24; 修回日期 2014 －10 －14; 接受日期 2014 －11 －15 基金项目 国土资源部海洋油气资源和环境地质重点实验室基金 MRE201217 作者简介 李小琳， 硕士研究生， 主要从事海洋化学与环境微生物研究工作。E- mail lxlblair163． com。 通讯作者 张培玉， 博士， 教授， 主要从事环境生物技术研究工作。E- mail envbio163． com。 文章编号 02545357 2014 06088507 DOI 10． 15898/j． cnki． 11 －2131/td． 2014． 06． 020 加速溶剂萃取技术提取海洋沉积物中游离态脂肪酸的方法研究 李小琳1， 2，贺行良2， 3，李凤2， 3，张媛媛2，陈立雷1， 2，张培玉1* 1． 青岛大学环境科学与工程学院，山东 青岛 266071; 2． 国土资源部海洋油气资源和环境地质重点实验室，山东 青岛 266071; 3． 中国海洋大学化学化工学院，山东 青岛 266100 摘要 脂肪酸是沉积物中含量最丰富的脂类标记物之一， 其存在形式 主要有游离态脂肪酸和结合态脂肪酸。游离态脂肪酸可由溶剂直接 提取， 结合态脂肪酸是在已提取出游离态脂肪酸的沉积物残渣中加入 酸碱加热后再用溶剂提取。加速溶剂萃取技术 ASE 因成本低和操 作毒性小， 在脂肪酸研究中得到了广泛的应用。本文采集东海近海海 域沉积物作为研究样本， 由于其中游离态脂肪酸含量丰富， 而结合态 脂肪酸含量过低， 测定结果精密度差， 难以作为方法研究对象， 因此主 要针对游离态脂肪酸应用 ASE 法进行提取， 研究了各种实验条件， 包 括萃取剂、 萃取温度、 静态萃取时间和循环次数的选择与优化。分析 结果表明， 甲醇 － 二氯甲烷 V/V， 1 ∶ 3 更适合作为萃取剂; 随着萃取 温度、 静态萃取时间、 循环次数的增加， 不同类型脂肪酸的提取效率各 不相同， 以涵盖碳原子数最多为先决条件， 以脂肪酸的萃取效率最大 化为依据， 确定了 ASE 的实验条件是 萃取温度 110℃， 静态提取时间 10 min， 循环 3 次。用这种处理方法 5 次测定沉积物样品中大部分游 离态脂肪酸的精密度为 3． 3 ～19． 0， 其替代物回收率为 72． 2 ～ 104． 6。该方法应用于分析实际海洋沉积物样品， 相比于传统的索 氏提取法， 流程简单， 极大地提高了工作效率。 关键词 海洋沉积物; 游离态脂肪酸; 甲醇 － 二氯甲烷; 加速溶剂萃取 中图分类号 O658． 2; O623． 11文献标识码 B 脂肪酸是沉积物中含量最丰富的脂类标记物之 一， 同时脂肪酸还是所有生物体的重要组分， 广泛存 在于海洋浮游植物 如海洋微藻和大型海草 、 浮游 动物、 陆源高等植物以及细菌等生物中， 其中海藻中 的脂肪酸含量占有机质的 5 ～ 25［1 －2 ］。脂肪酸 分子中含有羟基官能团， 可以与沉积物中的大分子 有机物、 矿物等发生相互作用， 因而沉积物中脂肪酸 的存在形式主要有游离态脂肪酸和结合态脂肪酸 包 括 碱 不 稳 定 态 脂 肪 酸 和 酸 不 稳 定 态 脂 肪 酸 ［3 －10 ］。研究表明， 不同海区的沉积物中其脂类 物质的形态分布不同， Wakeham［11 ］发现黑海沉积物 中的脂肪酸以游离态和碱不稳定态存在， 其中游离 态为主要存在形态。胡建芳 ［12 ］研究表明南海沉积 物柱状样中的脂类物质几乎完全以游离态形式存 在。而 Zegouagh 等 ［13 ］研究长江口 2 个表层沉积物 中的脂肪酸， 发现结合态脂肪酸含量高于游离态。 目前针对中国海域沉积物中脂肪酸等脂类物质 的形态分布研究已有报道， 但对于提取脂肪酸的方 588 ChaoXing 法探索研究较少。不同形态的脂肪酸其提取方法又 有不同难点与差异 游离态脂肪酸可由溶剂直接萃 取得到， 结合态脂肪酸是在已提取出游离态脂肪酸 的沉积物残渣中加入酸碱加热后再用溶剂提取。目 前地质样品生物标志化合物分析方法中， 索氏提取、 超声波提取和加速溶剂萃取 ASE 是使用广泛的脂 类化合物提取方法 ［14 －17 ］。索氏提取是一种经典高 效的提取方法。Wakeham［11 ］提取黑海沉积物中的 脂肪酸、 胡建芳 ［12 ］提取南海沉积物中的脂肪酸以及 Zegouagh 等 ［13 ］对长江口表层沉积物中脂肪酸的提 取， 均采用索氏提取法。但该法耗时长、 样品需求量 较大、 溶剂使用量大， 一些高沸点溶剂以及受热易分 解或变色的物质不宜采用此方法 ［16 ］。超声波提取 法操作相对简单， 设备较便宜， 但残渣与抽提物的分 离操作需消耗大量溶剂、 消耗时间长， 尤其对于有机 质含量低的地质样品难以操作 ［17 ］。ASE 是在较高 的温度和压力下用有机溶剂萃取固体或半固体的自 动化方法， 具有省时省溶剂、 成本低和操作毒性小等 优点， 且萃取效率不低于经典的索氏提取 ［18 ］， 此法 在脂类生物标志化合物研究中已经得到了较广泛的 应用。Andersson 等 ［19 ］利用 ASE 法采用两次加热两 次循环的循环过程， 同时提取样品中正构烷烃、 芳 烃、 脂肪醇、 脂肪酸以及磷脂等多种脂类生物标志 物， 并应用于东欧俄罗斯北极地区全新世泥炭序列 的研究， 极大地提高了工作效率。但 ASE 技术以海 洋沉积物作为研究对象的方法研究报道较少。 本文采集东海近海海域沉积物作为研究样本， 由于样品中游离态脂肪酸含量丰富， 而结合态脂肪 酸由于含量过低， 测定结果精密度差 ［10， 20 ］， 难以作 为方法研究对象， 因此本文针对游离态脂肪酸应用 ASE 法进行提取， 并对 ASE 萃取剂的选择、 萃取温 度、 静态萃取时间和循环次数等实验条件进行了优 化， 以期建立一种简单、 快速地提取海洋沉积物样品 中游离态脂肪酸的方法。这对于今后进一步研究沉 积物中脂肪酸的迁移、 转化和降解， 乃至脂肪酸对环 境变化指示作用的应用等均有重要意义。 1实验部分 1． 1仪器及工作条件 ASE200 型加速溶剂萃取仪 美国 Dionex 公 司 ; 7890A －5975C 型气相色谱 － 质谱联用仪 GC － MS， 美国 Aglient 公司 ; KL512/509J 型恒温水浴 氮吹仪 北京康林公司 。 气相色谱条件 HP － 5 石英毛细管柱 50 m 0． 25 mm 0． 25 μm ; 进样口温度 300℃; 升温程 序 60℃保持 1 min， 然后 5 ℃ /min 升温至 310℃并 保持 14 min; 载气为高纯氦气 99． 999 ， 柱流速 1． 5 mL/min， 进样量 1 μL， 不分流进样。 质谱条件 电子轰击 EI 离子源， 电子能量 70 eV; 传输线温度280℃; 离子源温度230℃; 四极杆温 度 150℃; 溶剂延迟 6 min; 全扫描模式 ［21 ］。 1． 2主要试剂 硅胶 填 料 SiO2， 0． 147 ～ 0． 175 mm， 美 国 Supelco 公司 ; 1 － 十九酸 C19H38O2， 上海 Sigma － Aldrich 贸易有限公司 ; 衍生化试剂 BF3－ MeOH 上海安谱科学仪器有限公司 ; 二氯甲烷、 甲醇、 氯 仿、 正己烷 HPLC 级， 德国 Merck 公司 。 1． 3样品采集与保存 本研究取得沉积物样品是位于闽浙沿岸泥质区 的褐色黏土。取样器为多管式重力采样器。样品采 集后， 现场按密集型 1 cm 间距分割成子样， 放入已 于 450℃ 灼烧过的铝箔中包裹封装， 冷冻保存 －20℃ 至分析。 1． 4分析方法 将海洋沉积物样品冷冻干燥、 磨碎、 过筛， 称量 适量处理好的样品并加入替代物 1 － 十九酸。设定 萃取溶剂为甲醇 － 二氯甲烷 V/V， 1 ∶ 3 ， 静态萃取 时间 5 min， 萃取温度 110℃， 循环 2 次等条件进行 ASE 萃取， 得到总可萃取有机质。萃取液加入铜片 过夜脱硫。高纯氮气 99． 99 吹干后加入 6 氢 氧化钾 － 甲醇溶液于 80℃ 加热水解 2 h， 再以正己 烷萃取分液， 得到上层清液为中性 － 非极性组分， 向 萃取剩余液中加入盐酸使其 pH ＜2。正己烷萃取分 液， 得到上层清液为酸性 － 极性组分。氮气吹干加 入衍生化试剂 BF3－ MeOH 溶液于 90℃ 下进行2 h 衍生化反应。取出后于干燥器内降至室温， 正己烷 萃取分液， 得到上层清液， 氮吹浓缩转移到样品瓶 中， 用正己烷润洗吹干定容， 上机分析。 1． 5定性分析和定量分析 为了方便讨论， 现将脂肪酸 游离态脂肪酸， 下 文统一简称脂肪酸 分成如下 5 类 ［22 －24 ］。 LSFA 长链饱和脂肪酸 碳数大于 20 的偶数 碳正构饱和脂肪酸。 MSFA 中等链长饱和脂肪酸 碳数不大于 20 的偶数碳正构饱和脂肪酸。 MUFA 单不饱和脂肪酸 含有一个不饱和双 键的脂肪酸。 BRFA 支链脂肪酸 带有支链的脂肪酸。 688 第 6 期 岩矿测试 http ∥www． ykcs． ac． cn 2014 年 ChaoXing OFA 奇数碳脂肪酸 碳链长度为奇数的正构 饱和脂肪酸。 脂肪酸的含量 1 － 十九酸含量 脂肪酸的峰 面积/1 － 十九酸的峰面积。 单体化合物的定性分析可根据保留时间、 色谱 图与本仪器数据系统内 NIST08 谱库中的谱图进行 自动检索确定。 2结果与讨论 2． 1萃取条件优化 为优化 ASE 法的实验条件， 分别改变萃取条 件 萃取溶剂为甲醇 － 二氯甲烷 ， 1 ∶ 3 、 甲醇 － 二 氯甲烷 1 ∶ 9 和氯仿， 静态萃取时间为 5、 10 和 15 min， 萃取温度为 70℃、 110℃ 和 150℃， 循环次数是 1、 2 和 3 次。不同条件下的样品做 3 次重复性实 验。最终以脂肪酸的提取效率为依据， 选择 ASE 法 的最佳实验条件。 2． 1． 1萃取溶剂 固定静态萃取时间 5 min， 循环 2 次， 萃取温度 110℃， 利用 3 种不同极性的萃取剂 甲醇 － 二氯甲 烷 1 ∶ 3 、 甲醇 － 二氯甲烷 1 ∶ 9 和氯仿， 提取海 洋沉积物中脂肪酸， 经 3 次重复性试验， ASE 提取脂 肪酸总量的精密度分别为 10、 13 和 5。取 3 次实验平均值， ASE 提取脂肪酸总量分别为 24． 68、 19． 21、 16． 71 μg/g。如图 1 所示， 甲醇 － 二氯甲烷 1 ∶ 3 、 甲醇 － 二氯甲烷 1 ∶ 9 、 氯仿作为萃取剂 提取的各脂肪酸的总量、 不同类别的脂肪酸的含量 以及单体脂肪酸的含量均依次递减; 相对于含量较 低的脂肪酸类别， 含量最高的 MSFA 特别是 C14、 C16和 C18的单体脂肪酸 的规律最为明显; 甲醇 － 二 氯甲烷作为萃取剂的提取效率相对于氯仿更为明 显。对比不同体积比的甲醇 － 二氯甲烷萃取剂， 甲 醇 － 二氯甲烷 1 ∶ 3 的提取效率高于甲醇 － 二氯 甲烷 1 ∶ 9 ， 这可能是由于甲醇的极性更大， 与脂 肪酸的极性接近， 基于相似相容原理使脂肪酸更容 易在甲醇溶液中被提取出来。因此， 本文选择具有 优势的甲醇 － 二氯甲烷溶剂 1 ∶ 3 对 ASE 萃取条 件进行优化。 2． 1． 2萃取温度 以甲醇 － 二氯甲烷 1 ∶ 3 为萃取溶剂， 固定静 态萃取时间 5 min， 循环 2 次， 改变萃取温度 70℃、 110℃、 150℃ ， 研究不同温度下脂肪酸提取效率， 经 3 次重复性试验， ASE 提取脂肪酸总量的精密度 分别为 3、 11 和 8。取 3 次实验平均值， ASE 图 1不同溶剂对脂肪酸提取效率的影响 Fig． 1Effect of solvent on extraction efficiency of fatty acids a 萃取溶剂对不同类型脂肪酸的提取效率; b 萃取溶剂对单体脂肪酸的提取效率。 提取脂肪酸的总量分别是 20． 89、 21． 73、 21． 23 μg/g。如图 2 所示， 不同类别脂肪酸的提取量对于 温度条件所呈现的规律有所不同 MUFA 以及 BRFA 的提取量随着温度的增加逐渐提高; LSFA、 MSFA 以及 OFA 的提取量在 110℃ 条件下最高， 而 在 70℃和 150℃条件下其提取量差距较小且在误差 范围内; 单体脂肪酸与其对应的脂肪酸类型所呈现 的规律相同。ASE 提取不同类型的脂肪酸其所需的 最适温度不同， 由于 MUFA 的双键以及 BRFA 中的 支链增强了脂肪酸的极性， 减弱其稳定性， 而 LSFA、 MSFA 以及 OFA 作为饱和脂肪酸结构稳定， 极性差 距造成了其最适温度的变化 ［18 ］。根据样品中脂肪 酸的种类及含量不同， 可以选择不同的反应温度， 本 文作为脂肪酸的方法研究， 选择涵盖脂肪酸种类更 多的最适温度为 110℃。 2． 1． 3静态萃取时间 以甲醇 － 二氯甲烷 1 ∶ 3 为萃取溶剂， 固定萃 取温度 110℃， 循环 2 次， 改变静态萃取时间 5、 10、 788 第 6 期李小琳， 等 加速溶剂萃取技术提取海洋沉积物中游离态脂肪酸方法研究第 33 卷 ChaoXing 图 2不同萃取温度对脂肪酸提取效率的影响 Fig．2Effect of temperature on extraction efficiency of fatty acids a 温度对不同类型脂肪酸的提取效率; b 温度对单体脂肪酸的提取效率。 15 min ， 研究不同静态萃取时间下脂肪酸提取量的 变化， 经过 3 次重复性试验， ASE 提取脂肪酸总量的 精密度分别为 10、 4 和 14。取 3 次实验平均 值， ASE 提取脂肪酸的总量分别是 21． 83、 24． 23、 23． 56 μg/g。从图 3 可以看出， 不同静态萃取时间 条件下， 不同类别脂肪酸的提取量所呈现的规律有 所不同 MUFA 以及 BRFA 的提取量随着萃取时间 的增加逐渐降低， 这可能是由于 MUFA 的双键以及 BRFA 中的支链影响， 萃取时间加长反而不容易保 持其稳定性致使萃取效率降低; LSFA 以及 OFA 的 提取量在 10 min 条件下最高， 而在 5 min 和 15 min 条件下其提取量差距较小且在误差范围内; 脂肪酸 含量最高的 MSFA， 其最适静态萃取时间为 15 min， 由于其含量相对较高， 长时间静态萃取有利于提取 更多样品中的脂肪酸。各单体脂肪酸与其对应的脂 肪酸类型所呈现的规律相同， 根据样品中脂肪酸的 种类含量， 可以选择不同的静态萃取时间， 本文作为 脂肪酸的方法研究， 综合考虑时间因素， 选择最适条 件需涵盖更多种类的脂肪酸， 最终选择 10 min。 图 3不同静态萃取时间对脂肪酸提取效率的影响 Fig．3Effect of static time on extraction efficiency of fatty acids a 静态萃取时间对不同类型脂肪酸的提取效率; b 静态萃取时间对单体脂肪酸的提取效率。 2． 1． 4循环次数 以甲醇 － 二氯甲烷 1 ∶ 3 为萃取溶剂， 固定萃 取温度 110℃， 静态萃取时间 5 min， 改变循环次数 1、 2、 3 次 ， 研究不同循环次数下脂肪酸提取效率 的变化， 经过 3 次重复性试验， ASE 提取脂肪酸总量 的精密度分别为 2、 11和 0． 4。取 3 次实验平 均值， ASE 提取脂肪酸的总量分别是 22． 60、 23． 45、 24． 77 μg/g。如图 4 所示， 随着循环次数的增加， 脂 肪酸的提取量逐级增加， 循环 3 次时对于脂肪酸的 提取量略高于其他条件的提取量。可见， 多次循环 有利于提高脂肪酸的萃取效率， 本文作为方法研究， 选择最优条件循环 3 次。 2． 2方法精密度与回收率 利用 ASE 提取游离态脂肪酸所选择的优化条 件 萃取溶剂甲醇 － 二氯甲烷 1 ∶ 3 ， 萃取温度 110℃， 静态萃取时间 10 min， 循环 3 次。在选定的 优化条件下重复操作 5 次， 表 1 分析结果表明， 大部 分脂肪酸的方法精密度 RSD 为 3． 3 ～ 19． 0， 而 C28和 C30的脂肪酸可能因为含量低致使精密度偏 888 第 6 期 岩矿测试 http ∥www． ykcs． ac． cn 2014 年 ChaoXing 图 4不同循环次数对脂肪酸提取效率的影响 Fig． 4Effect of cycles on extraction efficiency of fatty acids a 循环次数对不同类型脂肪酸的提取效率; b 循环次数对单体脂肪酸的提取效率。 大， C12和 C13的脂肪酸可能由于碳链短， 实验过程中 易挥发损失造成精密度略大。替代物在样品预处理 前定量加入样品中， 随样品经过预处理和仪器分析 的全过程。由于替代物不存在于样品中， 可以认为 替代物的损失或沾污的程度， 即回收率， 能够准确测 量 ［25 ］。以 1 － 十九酸作为样品替代物， 得到替代物 回收率为 72． 2 ～104． 6。 3实际样品分析 采集东海海域及黄海近海海域中不同位置的海 洋沉积物样品各 3 个， 其中东海海域的褐色黏土样 品中脂肪酸含量相对高于黄海海域， 而且不同海域 中的脂类物质均以游离态脂肪酸为主。6 个不同样 品中均含有饱和脂肪酸、 支链脂肪酸和单不饱和脂 肪酸， 种类较复杂， 符合实际样品分析条件。 按上述实验方法的最佳方案提取、 分析海洋沉 积物中的脂肪酸， 测定结果见表 2， ASE 法可作为海 洋沉积物中脂肪酸的分析方法。由不同海域、 不同 位置的沉积物样品中脂肪酸的含量分布情况可见， 实际样品中检测到的脂肪酸， 包含了 C12～ C30的所 有饱和脂肪酸、 C13～ C17的部分支链脂肪酸以及常 见 C16 ∶ 1 n －7、 C18 ∶ 1 n －7、 C18 ∶ 1 n －5 、 C22 ∶ 1 n －9等不饱 和脂肪酸。 表 1方法精密度 Table 1Precision tests of the 组分 脂肪酸含量 μg/g 12345平均值 RSD C12 ∶ 0 0．2810．2600．3620．3100．3910．32117．0 a －C13 ∶ 0 0．0630．0510．0720．0850．0780．07019．0 C13 ∶ 00．1050．0960．1220．1270．1330．11713．3 i －C14 ∶ 0 0．2250．2010．2340．2610．2450．2339．7 C14 ∶ 02．3622．2802．2192．3882．4012．3303．3 i －C15 ∶ 0 1．2101．0581．1801．0501．1971．1396．9 a －C15 ∶ 00．9060．8910．9171．0001．0090．9445．9 C15 ∶ 0 1．1091．1001．1161．1631．2231．1424．5 i －C16 ∶ 0 0．4240．3990．4140．3990．4450．4164．7 C16 ∶ 1 n －70．3900．3910．4890．5390．4820．45814．4 C16 ∶ 0 8．0656．0896．8756．5366．5456．82211．0 i －C17 ∶ 00．2940．2350．2460．2630．2660．2618．6 a －C17 ∶ 0 0．3040．2840．2830．2740．3130．2925．7 C17 ∶ 00．4480．4790．4580．4410．5000．4655．2 C18 ∶ 1 n －70．765 0．7210．8770．9870．8670．84412．3 C18 ∶ 1 n －50．3030．2750．2920．2860．3100．2934．7 C18 ∶ 0 4．0053．5874．3704．5093．7074．03610．0 C20 ∶ 0 0．5310．4940．5200．4340．4990．4967．6 C21 ∶ 00．0700．0780．0830．0880．0870．0819．3 C22 ∶ 1 n －90．193 0．1860．1720．1910．1990．1885．3 C22 ∶ 00．4500．4710．4590．3760．4610．4438．7 C23 ∶ 0 0．0780．1000．0930．0950．0950．0929．3 C24 ∶ 00．3830．3870．3810．2910．3920．36711．6 C25 ∶ 0 0．0430．0650．0520．0560．0590．05514．9 C26 ∶ 00．1600．1650．1690．1890．2340．18316．5 C27 ∶ 0 0．0290．0210．0240．0290．0320．02716．2 C28 ∶ 0 0．0630．0740．0770．1030．1060．08522．6 C30 ∶ 00．0170．0240．0250．0160．0270．02223．3 回收率 104．672．2101．4 91．984．490．8－ 4结语 通过选择萃取剂， 优化萃取温度、 静态萃取时间、 循环次数等参数， 建立了 ASE 快速提取海洋沉积物 中游离态脂肪酸的方法。对于萃取温度及静态萃取 时间两个条件， 不同类型的脂肪酸所呈现的规律性有 所差异， 该方法以提取脂肪酸含量最大化 提取效率 最高 为依据， 优化了最佳实验条件。大部分游离态 脂肪酸的方法精密度为 3． 3 ～19． 0， 替代物回收 率为72．2 ～104． 6。实际样品分析结果显示， 本 文针对游离态脂肪酸选择 ASE 进行萃取， 对比文献 ［ 10 －13］ 中传统的索氏提取法， 该方法流程简单， 极 大地提高了工作效率， 同时具备精密度良好等特点， 适用于海洋沉积物样品中游离态脂肪酸的定量分析。 988 第 6 期李小琳， 等 加速溶剂萃取技术提取海洋沉积物中游离态脂肪酸方法研究第 33 卷 ChaoXing 表 2实际样品中脂肪酸的分析 Table 2Analytical results of n- alkanes in samples 组分 黄海海洋沉积物 μg/g 样品 1样品2 样品3 东海海洋沉积物 μg/g 样品 1样品2 样品3 C12 ∶ 00．200．260．220．100．340．74 a － C13 ∶ 00．020．030．020．010．060．13 C13 ∶ 0 0．090．100．080．050．130．25 i － C14 ∶ 00．150．150．110．070．260．38 C14 ∶ 00．740．870．720．982．392．23 i － C15 ∶ 00．120．150．150．291．281．37 a － C15 ∶ 00．170．180．160．210．971．02 C15 ∶ 00．380．430．310．561．231．36 i － C16 ∶ 0 0．180．200．140．120．460．54 C16 ∶ 1 n －70．160．130．050．190．470．69 C16 ∶ 02．873．864．065．946．605．55 i － C17 ∶ 00．050．060．080．070．270．46 a － C17 ∶ 0 0．040．050．060．090．330．38 C17 ∶ 00．240．280．200．250．560．71 C18 ∶ 1 n －70．120．170．130．860．880．75 C18 ∶ 1 n －50．070．120．160．160．320．40 C18 ∶ 01．391．922．694．414．053．84 C20 ∶ 0 0．340．380．360．350．560．73 C21 ∶ 00．100．100．080．040．090．17 C22 ∶ 1 n －90．040．060．530．490．200．25 C22 ∶ 0 0．360．380．060．040．490．77 C23 ∶ 00．100．080．360．060．100．21 C24 ∶ 00．360．290．070．370．400．81 C25 ∶ 00．090．050．300．050．050．16 C26 ∶ 00．350．050．060．230．160．52 C27 ∶ 00．060．200．250．030．020．11 C28 ∶ 00．180．080．120．130．070．37 C30 ∶ 00．060．030．020．050．020．20 应用 ASE 测定海洋沉积物中的游离态脂肪酸， 由于脂肪酸的种类繁多， 结构复杂， 对含不同种类脂 肪酸的样品要分别改变实验条件， 以减少测定误差。 各种脂肪酸的结构、 含量、 稳定性千差万别， 难以用 一种方法涵盖所有类型的脂肪酸， 此方法主要是针 对游离态脂肪酸萃取条件的优化， 而结合态脂肪酸 由于含量较低难以提取等因素未作研究， 该方法精 确度还有待提高以备将来测定含量偏低的结合态脂 肪酸。 5参考文献 ［ 1］刘亚娟． 东海赤潮高发区沉积物中脂类生物标记物的 分布和指示意义［ D］ ． 青岛 中国海洋大学， 2012． ［ 2］Woulds C，Middelburg J J，Cowie G L． Alteration of org- anic matter during infaunal polychaete gut passage and links to sediment organic geochemistry． Part Ⅰ Amino acids［ J］ ． Geochimica et Cosmochimica Acta，2012， 77 396 －414． ［ 3］Campos G 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