两株石油烃降解菌的分离及原油降解地球化学特征.pdf

2 0 1 1 年 6月 第 3 0卷第 3期 大 庆石 油地 质 与开发 P e t r o l e u m Ge o l o g y a n d Oi l fie l d De v e l o p me n t i n Da q i n g J u n e，2 0 1 1 V0 l _ 3 0 No ． 3 DOI 1 0 ． 3 9 6 9 ／ J ． I S S N ． 1 0 0 0 3 7 5 4 ． 2 0 1 1 ． 0 3 ． 0 3 3 两 株石 油烃 降解 茵 的分 离及原 油 降解 地球 化 学特征 陶 文 ， 向廷 生 ， 刘文涛 齐立刚 1 ．长江大学油气资源与勘探技术教育部重点实验室 ，湖北 荆州4 3 4 0 2 3 ；2 长江大学地球化学系，湖北 荆州4 3 4 0 2 3 ； 3 ．大庆油 田有限责任公 司第一采 油厂 ，黑龙江 大庆1 6 3 0 0 0；4 ．大庆油田有限责任公司创业集 团公司 ，黑龙 江 大庆1 6 3 0 0 0 摘要 为研究在 自然界 条件 下内源微生物降解原油 的机 理 ，从 辽河原油 中发现具有较 强原油降解 能力的混合菌 种 ，进行分离纯化 ，选择 3 和 9 菌株进行原油降解实验研究 。通过微生物 降解模 拟实验 、降解后液体表面张力 测定 和原油降解前后饱 和烃 、芳烃 G C MS定量分析 ，将两菌株对原油不 同组分 的降解效果进行对比。结果表明 ， 两菌株虽然不具备产表面活性剂的能力，但具有较强降解饱和烃的能力，且较易降解正构烷烃，同时发现9 群 菌 株具更强的降解正构烷烃及姥鲛烷和植烷的能力 ，而3 菌株对三环萜烷和甾烷系列的降解能力较好。3 和9 菌 株对萘系列和菲系列的降解效果均不明显，且对萘和菲系列的芳香烃化合物的降解有选择性。研究结果可为 ME O R矿场试验及微生物修复提供依据。 关键词 微生物降解 ；族组分 ；G C MS ；生物标志化合物 中图分类号T E 3 5 7 ． 4 6 文献标识码A 文章编号1 0 0 0 3 7 5 4 2 0 1 1 0 3 - 0 l 5 4 - 0 5 I S oLATI oN oF TW o PETRoLEUM HYDRoCARBoN DEGRADI NG BACTERI A AND GEoCHEM I CAL CHARACTERI STI CS oF CRUDE oI L DEGRADATI oN T A O We n ，X I A N G T i n g s h e n g ，L I U We n t a o ，Q I L i g a n g 1 ． MO E K e y L a b o r a t o r y i n O i l G a s R e s o u r c e s a n d E x p l o r a t i o n T e c h n i q u e o f Y a n g t z e U n i v e r s i t y ，J i n g z h o u 4 3 4 0 2 3 ，C h i n a ；2 ． G e o c h e mi s t r y D e p a r t m e n t o f Y a n g t z e U n i v e r s i t y ， J i n g z h o u 4 3 4 0 2 3 ， C h i n a ；3 ． N o ． 1 O i l P r o d u c t i o n C o m p a n y of D a q i n g O i lfi e l d C o m p a n y L t d ． ，D a q i n g 1 6 3 0 0 0， C h i n a ； 4 ． P i o n e e r C o m p a n y G r o u p ofD a q i n g O i lfie l d C o m p a n y L t d ． ， D a q i n g 1 6 3 0 0 0 ，C h i n a Ab s t r a c t I n o r d e r t o s t u d y t h e me c h a n i s m o f e l u d e o i l d e g r a d a t i o n b y i n d i g e n o us mi c r o b e s i n t h e n a t u r a l c o n d i t i o n，t h e mi x e d s t r a i n s wi t h r e l a t i v e l y s t r o n g de g r a d a t i o n a b i l i t y t o wa r d s c r u d e o i l i s d i s c o v e r e d i n Li a o h e c r u d e o i l ． Af t e r i s o l a t i o n a n d p u r i fi c a t i o n，3 a n d 9 s t r a i n s a r e s e l e c t e d t o c a r r y o ut t he e x p e r i me n t a l s t u d y o f c r u d e o i l de g r a - d a t i o n． T h r o u g h t h e mi c r o b i a l d e g r a d a t i o n s i mu l a t i n g e x p e r i me n t s ，t h e me a s u r e me n t o f l i q u i d s u r f a c e t e n s i o n a f t e r d e g r a d a t i o n a n d t h e GC MS q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o f s a t u r a t e d h y d r o c a r b o n a n d a r o ma t i c h y d r o c a r b o n b e f o r e a n d a f t e r c r ud e o i l d e g r a d a t i o n，t h e d e g r a d a t i o n e f f e c t s o f t h e s e t wo s t r a i n s t o wa r d s t h e d i f f e r e n t c rud e o i l c o mp o n e n t s a r e c o mp a r e d．Th e r e s u l t s h o ws t ha t a l t h o u g h t h e t wo s t r a i n s d o n o t h a v e t h e a b i l i t y o f g e n e r a t i n g s u ffa c t a n t s ，t he y h a v e t he r e l a t i ve l y s t r o ng a bi l i t y o f d e g r a d i n g s a t u r a t e d h y d r o c a r bo n a n d t e nd t o d e g r a d e n o r ma l p a r a ffin h y d r o c a r b o n 收稿 日期 2 0 1 0 一 l 1 0 4 改回 日期 2 0 1 0 - 1 2 1 6 基金项 目 国家 自然科学基金项 目 “ 生物降解稠油油藏本源微生物多样性及生物降解作用” 4 0 9 7 2 1 0 0 资助 。 作者简 介 陶文 ，女 ，1 9 8 3年生 ，在读硕十 ，主要从事石油微生物方 面的研究 。 E ma i l t a o we n 50 7 1 6 3． C O i l 第 3 O卷第 3期 陶义等 两株石油烃降解菌的分离及原油降解地球化学特征 1 5 5 mo r e e a s i l y．Me a n whi l e。i t i s f o u n d t h a t 9 s t r a i n h a s t h e r e l a t i v e l y s t r o n g e r a b i l i t y o f d e g r a d i n g n o r ma l pa r a ffi n h y d r o c a r b o n，p r i s t a n e a n d p hy t a n e，ho we v e r，3 s t r a i n h a s t h e r e l a t i v e l y b e t t e r a b i l i t y o f d e g r a d i ng t r i c y c l i c t e r p a n e a n d g o n a ne ． Bo t h 3 a n d 9 s t r a i n s d o n o t ha v e a n o bv i o u s d e g r a da t i o n e f f e c t t o wa r ds n a p h t h a l e n e a n d p h e n a n t h r e ne s e r i e s ，b ut t he y ha v e s e l e c t i v i t y f o r t h e de g r a d a t i o n o f a r o ma t i c c o mpo un d s o f n a p h t h a l e ne a n d p h e n a n t hr e n e s e r i e s ．Thi s r e s e a r c h r e s u l t c a I 1 p r o v i d e e v i d e n c e s for MEOR fie l d t e s t a nd mi c r o bi a l r e s t o r a t i o n． Ke y wo r d s mi c r o b i a l d e g r a d a t i o n；g r o u p c o mp o n e n t ；GC MS；bi o ma r k e r 已知 自然界 中，存在许多能够以石油或其化工 产品为碳源和能源的微生物 ，据统计 ，已经发现能 够降解石油的微生物有 2 0 0多种 。不同的微生物 对不同的成分有不同的降解能力 ，或者在降解中起 到不同的作用。许多学者就烃类化合物的微生物代 谢途径进行 了研究 ，发现 微生物利用 石油烃 的 能力主要依赖于烃类混合物中各化合物的性质 ，发 现有些细菌只能降解 c 一c 3 。 和 C 。 一c 2 的石油物 质 ，有些能降解 c 。 一c ， 的石油物质 ，其 中有些对 石油有较大的吸附能力 ，还有些细菌有较大的乳化 石 油 的能力 。 大量研究证明微生物可以将长链烷烃降解成碳 链较 短 的烷烃 ，改变 石油 的组 成 ，实 现石 油化 学 品 的生 物 转 化 ，获得 优 质汽 油 等 J 。与 从 自然 界 如含油污泥中分离筛选的微生物注入地层 的外 源微牛物采油技术相 比，内源微生物不存在菌种适 应问题 ，工艺简单 、成本低 ；但冈油藏本微生物种 类有限，且有利用价值的细菌和有害的细菌并存 ， 在一定程度上 限制 了该技术 的发展和应用 4 - 7 J 。进 一 步研究降解效果较好 的混合本源菌 ，分析降解后 培养液表面张力变化 以及原油气相色谱一 质谱 图中 原油降解后相关地球化学参数 ，从而获得对原油不 同组分降解效果更好的纯菌种 。 l材料和方法 1 ． 1材料 油样 辽河油 田原 油。菌种 辽河 油 田冷 4 6 原油 中 的本源 微 生物 。培 养 基 Mg S O 7 H ， O 0 ． 4 L， Ca CI 2‘ 2H2 O 0． 0 2 g ／L， KH2 PO4 1 g ／L， K 2 H P O l g ／ L ， N H 4 N O 3 1 g ／ L ，酵 母 膏 1 g ／ L，蒸馏 水 1 L，微量元素液 按地层水离子浓度及 总矿化 度配制0 ． 5 ％ ，F e C 1 0 ． 0 5 g ／ L，p H 7 ． 0～ 7 ． 2 ，原 油为惟一碳源 ，在摇床 1 2 0 r ／ mi n 、3 7℃培养 7 d 。 1 ． 2菌 种 的分 离与纯 化 对冷 4 6原油本源菌培养液进行梯度稀释 ，依 次 稀 释 到1 0～、 l 0 ～、 l 0 一， 于1 2 0 r ／ mi n 、 3 7 ． 5 c c 摇床培养 2～3 d ，用移液枪取 3种不 同浓 度的菌液 0 ． 1 m L涂布于平板培养基上 ，每个浓度 接种 5～ 6个平行样 ，以确保能将 此本源菌 的每个 单菌落都能分离培养出来。选择不同颜色及形态的 单菌落 ，划线纯化 ，并将纯化后的菌株接种到试管 斜面培养 ，4℃保存。 1 ． 3原 油 降解 实 验 配制菌种活化培养基 2 0 0 m L，分装于 2个 锥 形瓶 中，高压蒸 汽灭菌 1 2 1℃ 、2 0 mi n ，用接 种 环 接 种 3和 9菌 苔 进 行 活 化 培 养 ， 于 1 2 0 r ／ mi n 、 3 7。 C 摇床培养 2～ 3 d 。配制烃降解菌培 养基 3 0 0 mL ，按 1 0 0 mL分装于锥形瓶 中，高压蒸 汽灭菌 1 2 1℃ 、2 0 m i n ，按 4 ％ 体积 比接种 3 和 9 活 化 菌 液 4 mL ，再 加 入 灭 过 菌 的 冷 4 6原 油 0 ． 2 mL ， 于 1 2 0 r ／ mi n 、3 7℃摇床培养 7 d 。 。 1 ． 4降解后培养液表面张力测定 利用 B Z Y 一 1全 自动表 面张力仪 测定降解后 培 养 液 的表 面张 力 。 1 ． 5气相色谱一 质谱分析 将对照样油样 、3 菌株和 9 菌株降解 7 d后的 油样进行气相色谱- 质谱分析。 1 色谱一 质谱条件 。仪器为 D S Q单 四级杆气 相色谱一 质谱仪 。其 中，正构烷 烃的标样是C D 饱和烃生物标志化合物的标样为 5 o L 一 雄甾烷 ，芳烃 的标样为 1 ，1 ’B i n o p h h h y l 。 2 饱 和烃升 温程序。5 0 恒温 1 m i n ，从 5 0℃至 1 0 0 o C的升温速率为 2 0 o C ／ m i n ，1 0 0℃至 3 1 0℃升温速率为 3℃／ mi n ，3 1 0 c 恒温 1 0 m i n 。 进 样 器 温 度3 0 0 ， 载 气 为 氮 气 ， 流 速 1 ． 0 4 mL ／ m i n ， 扫描范围 5 0～ 5 5 0 U 。检测方式为全 扫捕 和 单 扫 描 。电 离 能 量 7 0 e V，离 子 源 温 度 23 0 。 3芳 烃 升 温 程 序 。6 0℃ 恒 温 4 mi n ，从 6 0℃至 1 5 0 o C的 升 温 速 率 为 4 ℃／ mi n ，1 5 0 ℃ 至 3 0 0℃升 温 速 率 为 3。 【 ／ m i n ，3 0 0 ℃恒 温 2 0 mi n 。 进 样 器 温 度3 0 0 c C， 载 气 为 氮 气 ， 流 速 1 ． 0 4 m L ／ mi n ， 扫 描 范 围 5 0～ 5 5 0 H 。检测 方 式 为 全 扫 描 。 电离能量 7 0 e V，离子 源 温度 2 3 0 o C。 1 5 6 大庆石油地质与开发 2 0 1 1 正 2结果与分析 2 ． 1菌种的分离与纯化 从冷 4 6原油 中分离出的 3和 9 本源菌株 的 菌落形态如图 1 所示 。 a 3 菌株 b 9 菌株 图 1两菌株菌 落形 态 Fi g ． 1 B ac t e ri al c ol o ni e s m o rp h ol o g y o f t wo s t r a i ns 2 ． 2降解后培养液表面张力变化 由测定结果 表 1 可知 ，3 和 9 菌株培养 液表面张力为 5 7 ．7 m N ／ m和 5 7 ． 1 m N ／ m，相对于 对照样下降不明显，表明两菌株几乎不产生物表面 活性 剂 。 表 1 降解前后液体表面张力 Tab l e l Li qui d s ur f a c e t e n s i on be f o r e a nd a f t e r d e gr a da tio n 培养液样 品 表面张力／ 珊N 珊 蒸馏水 对照样 3 菌株 9 菌株 7 2 ． 6 6 6 ． 7 5 7 ． 7 5 7 ． 1 2 ． 3微生物作用前后原油的地球化学特征变化 将微生物反应前后的油样进行族组分分离。首 先 ，把原油在正 己烷中沉淀 过夜 ，然后进行过 滤 ，得到沥青质可溶有机质 ，然后将可溶有机质用 氧化铝／ 硅胶柱层析进行分离，得到饱 和烃 、芳烃 和非烃。依次对饱和烃 、芳烃和非烃干燥定量 ，确 定其含量。对饱和烃和芳烃做 G C ． MS分析。 2 ． 3 ． 1原 油样 品微 生物作 用前后族 组成特征 对照样油样 、3 和 9 菌株降解的原油油样 的 饱和烃总离子流图如图 2所示 。图2中显示该原油 样品为正常原油 ，被微生物作用后 ，正构烷烃含量 大幅度降低，9 菌株降解作用效果较为明显。 由图3可以看出，经过微生物作用以后 ，其饱 ．．．-Ll_f舢 图2对照样、3 和9 菌株油样饱和烃总离子流 Fi g ．2 Tot al i o n st re a m of s at u ra te d h yd r oc ar b on o f re fe r en ce s a m pl e， oi 1 s a m pl e wi t h 3 } } s t r ai n a nd oi l s a m pl e wi t h 9 st r ai n 饱和烃 芳烃 非烃 沥青质 饱芳比 图3原油微生物作用前后族组成对比 Fi g ． 3 Co mp a ri s o n o f g ro u p c o mp osi t io n b e fo re a nd a ft er mi c ro bi al act i o n of c ru de oi 1 和烃 、芳香烃 、非烃和沥青质的相对含量都发生了 显著变化。饱和烃相对含量明显降低 ，芳香烃、非 烃和沥青质的相对含量都有不同程度的升高，饱芳 比降低，这也是微生物降解原油的特征。说明微生 物优先降解饱和烃，从而造成了饱和烃相对含量降 低 ，而其他组分相对含量升高。 2 ． 3 ． 2饱 和烃 的定量 分析 2 ． 3 ． 2 ． 1正 构烷烃 和类异戊 二烯烷 烃特征 对照油样 、3 和 9 菌株降解油样 中部分饱和 烃绝对含量分析数据表 明，原油经 3 撑 和 9 撑 菌株降 解后 ，与对照样相比，各正构烷烃含量均有明显下 降 ，相对于高碳数正构烷烃而言 ，低碳数正构烷烃 ∞ ∞ ∞ ∞ m O 嘲姐靛罂 第 3 0卷第 3期 陶义等 两株 石油烃降解 菌的分 离及 原油降解地球化学特征 1 5 7 含量下降 的幅度 更大。而且 9 } } 菌株 降解后 的正构 烷烃含量均明显低于 3 菌株 ，这表 明 9 菌株 比 3 菌株具有更强 的降解原油正构烷烃 的能力。经两菌 株降解 后 ，P r和 P h的含 量均 明显 下 降 表 2 。 其 中9 菌株降解后 ，P r 的质量分数下降到 0 ． 0 3 0 0 者 下降 幅度 均 比 3 菌 株 大 ，表 明 9 菌 株 具 有更 好 的降解 P r 和 P h的能力 。 两菌株 降解 油样 ∑n c ／ ∑n c 值均 减小 ， 表明相 比于 n C ，碳链稍短的 n C ， 一 更容易被菌株 降解 ，这与文献[ 1 1 ]中的结论一致 ，而且 9 菌 1 0 ～，P h的质量分数下降到 0 ． 0 4 8 4 X 1 0～，两 株降解功能强于 3 菌株 ；P r ／ P h值经生物降解作用 表 2原 油饱和烃相关地球化 学参数 Tabl e 2 Re l a t e d g e oc he m i c a l par ame t e r s o f s at ur a t e d hy dr oc ar bo n i n c r ude oi l 注 P r - 一 一 姥鲛烷 ，P h 一植烷 。 后 均有 所增 加 ，表 明 3 和 9 菌 株 从 某 种 意 义 上 更 容易降解 P h ，但是微生物 降解作用对 P r ／P h值是 有影响的 ，在进行与生物降解有关的地球化学分析 时应注意到这 一点 ” 。P r ／ n C 。 和 P h ／ n C 两菌 株降解后的值相对于对照样而言是升高的，表明对 于相同碳数的正构和异构烷烃 ，两菌株更容易降解 正构烷烃。而且经微生物降解后单峰均变为双峰。 2 ． 3 ． 2 ． 2饱和烃分子标志物特征萜类 由图4。可以看出，c 。 T T C 。 1 丫 r为 C 。 三环萜 烷 ，其他名称照此类推 在微生物作用后含量略有 升高 ，而 C 的_一环萜烷 系列含量均降低。表明两 菌株对 三环萜烷都具有 降解作用 ，而 c 。 三环萜烷 却呈升高趋势 ，可能是 c 的三环萜烷经微生物降 解 后 生 成 了部 分 C ， 。 三 环 萜 烷 的原 因。 另外 ，3 菌 株对三环萜烷的降解能力 比9 菌株强 。 Cl 9 TT C 2 0 TT C 2 1 1 v r C2 2 TT C 2 3 TT C2 4 ， 丌C 2 5 1 v r 图4原 油微 生 物降 解 后三 环萜 烷分 布特 征 Fi g． 4 Di st ri b uti on c ha ra ct e ri st i CS o f t ri c ycli C t e rp an e aft e r mic r obi al d eg ra da ti o n o f cr ud e 0i l 2 ． 3 ． 2 ． 3饱 和烃分 子标 志物 特 征 甾类 由 图 5可 以看 出 ，该油样 品 中孕 甾烷 和 升孕 甾 烷含量很低 。甾烷系列均 随微生物 降解含量 变低 ， 尤其是 3 菌的降解效果十分明显。同时计算孕甾烷 与升孕 甾烷 的比值 ，对照样 、3 和 9 的比值分别为 3 ． 2 2、1 ． 7 1和 2 ． 0 3 ，这 个 比值 有 明显 下 降趋 势， 表明孕 甾烷含量下降得 比升孕 甾烷快 ，即 3 和 9 菌株可能优先降解孕甾烷。同样对于规则甾烷与重 排 甾烷 的比值 ，三者 的比值 分别为 4 ． 6 2 、2 ． 4 4和 2 ． 6 5，也呈明显下降趋势 ，表明两菌株对规则甾烷 的降解能力高于重排甾烷。这种降解特征也与其分 子结构特征吻合 ，分子结构稳定 的较难被降解 。 8 0 O 7 0O 6 0 0 呈i 5 0 0 ＼ 鬟4 O 0 咖l 蜓3 ∞ 2 OO l 。 0 0 孕 甾烷 升 孕甾烷规则 甾烷重排甾烷甲基甾烷 乙基 甾烷 图5原油微生物降解后甾烷系列分布特征 Fi g ．5 Di s t ri buti o n ch a rac te ri sti e s of go na ne s eri eS aft er mi c ro bi al d eg ra da ti o n o f c ru de 0i l 2 ． 3 ． 3芳香 烃 的定 量分析 萘 、菲等是常见的多环芳烃化合物 ，研究表明 绝大部分的多环芳烃主要通过生物降解途径从环境 中缓慢消失 ，因此多环芳烃的生物降解受 到广泛关 注 1 4 - 1 6 ] 。 ∞ ∞ ∞ 加 ∞ 舳 ∞ ∞ m 。 _ o [ ＼ 瓤 删略 l 5 8 大庆石油地质与开发 2 0 1 1 年 2 ． 3 ． 3 ． 1萘 系列 在此原油中三甲基萘含量最高 ，其次是 四甲基 萘 ，萘含量较低 。就降解趋势而言 ，萘随微生物降 解含量降低，甲基萘和乙基萘也呈降低趋势 ，但 乙 基萘 减少程 度低 于萘 和 甲基 萘 ，二 甲基 萘 、三 甲基 萘和四甲基萘 在微生物作用 后相对含量都 略有升 高 ，这是由于萘 、甲基萘和乙基萘的含量降低 ，使 得没有被降解的组分所 占比例升高。总体上看 ，9 和 3 菌对萘系列的降解效果均不明显 图6 。 7 0 6 O 5 0 4 。 棚 盔3 0 2 O l O O 萘 甲基萘 乙基萘 二甲基萘三甲基萘 四甲基萘 图6原油微生物降解后萘系列分布特征 Fi g ． 6 Di s t ri but i on c h ar act e ri st i cs o f n ap ht hal ene s e ri es a ft e r mi cr obi al de g ra da ti o n of c r ud e oi 1 2 ． 3 ． 3 ． 2菲系列 在菲系列中，降解效果与萘系列相似 ，但 总体 降解程度低于萘系列。菲系列 中只有菲的相对含量 在微生物作用后呈现出降低趋势 ，而其他物质 的相 对含量无明显变化 。从而可以看 出微生物优先降解 菲，然后才降解其 甲基取代化合物 ，且多 甲基取代 的菲系列比少 甲基取代的菲要更加稳定 ，更加不易 被微生物作用降解。 3结 论 1 由表面张力测定结果可知 ，3 ≠ } 和 9 菌株 表面张力下降不明显 ，表明两菌株可能不产生物表 面 活性 剂 。 2 经过微生物作用以后 ，油样 中饱和烃 、芳 香烃、非烃 和沥青质 的相对含量都发 生 了显著变 化 ，显示出微生物降解具有选择性。3 和 9 菌株均 优先降解低碳数饱和烃 ，但对于相同碳数的正构烷 烃和异构烷烃 ，两菌株更易降解正构烷烃 ，同时还 发现 9 菌株 比 3 菌株具有更强 的降解原油正构烷 烃及 P r 和 P h的能力。 3 饱和烃生物标志化合物 中，三环萜烷和甾 烷系列均能被两菌株降解 ，含量降低 幅度不大 ，但 3 菌对三环萜 烷和甾烷 系列 的降解能力 比 9 } } 菌株 强 ，同样也呈现出微生物降解的选择性 。 4 芳香烃化合物中，萘系列萘、甲基萘和乙 基萘随微生物降解含量降低 ，乙基萘减少程度低于 萘和甲基萘 ；菲系列只有菲的相对含量在微生物作 用后降低。总体上看，3 和 9 菌株对萘和菲系列 的 降解效果均不明显 ，而且萘和菲系列的芳香烃化合 物降解有选择性 ，优先降解无 甲基取代或少 甲基取 代的，多甲基取代的得到较好的保存。 参考文献 [ I ]王凤 兰，王志瑶 ，王晓冬 ．朝 5 O区块微生物驱先 导性 试验效 果及 认 识[ J ] ．大 庆 石 油 地 质 与 开 发 ，2 0 0 8 ，2 7 3 1 0 2 1 O 5 ． [ 2]佘跃惠 ， 何正国， 杨柳岸 ， 等 ．油砂山油 田本源微生 物分 子生物 学初步调查[ J j ．大庆石油地质与开发 ， 2 0 0 5， 2 4 5 8 2 - 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