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第 4 5卷 第 2期 2 0 1 6年 2月 化工技术与开发 Te c hn o l o g y De v e l o p me n t o f Che mi c a l l n d u s t Vo 1 ． 45 No ． 2 Fe b- 2 01 6 U P L C T U V测定啤酒中亮蓝含量 谭翔 ，曹利雅 贵阳市建材质量检验中心 ，贵州 贵阳 5 5 0 0 0 9 ； 2 ． 贵州医科大学公共卫生学院，贵州 贵阳 5 5 0 0 2 5 摘要 利用超高效液相色谱法测定啤酒中人工合成色素亮蓝的含量。采用色谱柱A C Q U I T Y U P L C B E H C 1 8 1 ．7 m 2 ． 1 m m5 0 m mC o l u m n ，流动相为 甲醇一 0 ．0 2 m o l - L - 乙酸铵 3 9 6 1 ，流速0 ． 3 mL- m i n ～ ，检测波长6 2 8 n m， 柱温1 6 ． 1 ℃，进样量5 L 。检测结果表明，亮蓝在1 ． 0 ～ 2 5 rag L r 0 ．9 9 9 4 间线性关系良好，平均 收率为9 8 ． 7 ％， R S D 0 ． 4 9 ％，在3 种市场所售啤酒中均未检测到亮蓝。该方法可以用于检测啤酒中是否添加人T合成色素亮蓝，为市 场上销售啤酒质量检测提供参考依据。 关键词 超高液； 啤酒； 亮蓝； 含量测定 中图分类号 O 6 5 7 ． 7 2 文献标识码 A 文章编号 1 6 7 1 ． 9 9 0 5 2 0 1 6 1 0 2 0 0 3 4 - 0 2 啤酒是深受大众喜爱的酒精饮料之一。现代有 些苦瓜 啤酒制造商为了让啤酒的色泽光鲜通常都会 加入人工合成色素亮蓝 [ 1 - 3 1 o亮蓝作为可食用色素适 用于糕点 、 糖果 和配制酒的着色 [ 4 - 6 ] o但 食 品添加 剂使用卫生标准 G B 2 7 6 0 2 0 1 4 中规定 ， 亮蓝在饮 料、 汽水 、 配制酒等的最大使用量为 0 ． 0 2 5 g k g [ 7 】 ， 含量超标会影响人体健康 】 。 由于常规性发酵啤酒 中不允许加入合成色素 ， 为了检测市场上常规性发酵啤酒中是否添加色素亮 蓝， 本文基于超高效液相色谱的优良性能， 建立了一 种更快 、 更简捷 、 灵敏度更高的啤酒 中亮蓝含量的测 定方法 [9 - 1 o ] 。 1 仪器与试药 Wa t e r s A C Q U I T Y超高 效液相 色谱仪 ， 色谱柱 A C Q U 1 T YU P L C B E HC 1 8 1 ． 7 ix m 2 ． 1 ra m 5 1 a r n C o lu m n o 亮蓝对照品 1 m g m L 一 ， 甲醇 色谱纯 ， 乙酸 铵 分析纯 ， 柠檬酸 分析纯 ， 氨水 分析纯 ， 无水 乙醇 分析纯 ， 纯净水。 啤酒 3种 市售 。 2 方法与结果 2 ． 1 色谱条件 色谱柱 AC QUI T Y U PL C B E H C 1 8 1 ． 7 i n 2 ． 1 m m 5 0 m m C o l u m n ； 流动卡 目 甲 醇 一 0 ． 0 2 mo l L 乙酸铵 3 9 6 1 ， 流速 0 ． 3 m L mi n ， 检测波长 6 2 8 n m， 柱温 1 6 ． 1 o C， 进样量 5 L 。 2 ． 2 对照品溶液的制备 取 l m g m L - 的亮蓝标准溶液于容量瓶， 加纯净水 分别稀释成浓度为 1 ． 0 mg L 『 、 5 ． 0 ra g L - 、 1 0 m g 、 1 5 mg L 『 、 2 0 m g L ～ 、 2 5 m g L 。 。 的亮蓝溶液。 2 ． 3 供试 品溶液制备 移 取 5 0 mL供 试 品， 加 热驱 除 C O ， 和 乙醇 ， 用 2 0 0 g L 的柠檬酸溶液调节 p H 6 ， 加热至 6 0 ℃， 将 1 g聚酰胺粉加水调成粥状 ， 倒入供试品溶液 中， 搅 拌 ， 抽滤 ， 用 6 0 C、 p H 4的柠檬酸水溶液洗涤 3 - 5 次 ， 然后用甲醇 一甲酸 6 4 混合溶液洗涤 3 - 5次 ， 再用 水洗至中性 ， 用乙醇 一氨水 一水 7 2 1 混合溶液解 吸 3 ～ 5次 ， 每次 5 m L ， 收集解 吸液， 加乙酸中和 ， 水浴 蒸发至干， 加 2 ． 0 0 m L水溶解 ， 经 0 ． 2 2 m滤膜过滤。 2 ． 4 线性关系 分 别 吸 取 浓 度 为 1 ． 0 mg L ～、 5 ． 0 ra g L ～、 1 0 mg L ～、 1 5 ra g L ～、 2 0 mg L ～、 2 5 m g L 的亮蓝 溶液 5 L注入超高效液相色谱仪 ， 按 2 ． 1的色谱 条 件进行测定 ， 以峰面积 】 ／ 对浓度 x， mg L 一 进行 线性 回归 ， 亮 蓝在 1 ． 0 ～ 2 5 m g L 范 围 内线性关 系 良好 ， 回归方程 y - 2 1 4 2 5 ， 1 5 8 8 ． 9 ， R -- 0 ． 9 9 9 4 。 2 ． 5 精密度考察 精 密 吸取 2 5 mg L 的对 照 品溶液 ， 按 照 2 ． 1 作者简介 谭翔 1 9 8 8 ． ，男，汉族 ，四川梓潼人 ，助理工程师 ，研究方向 分析检测 通讯联 系人 曹利雅 ，贵州医科大学公共卫生学院。E - m a i l 5 9 1 4 0 4 0 0 2 q q ． c o n 收稿 日期 2 0 1 5 1 2 2 4 学兔兔 w w w .x u e t u t u .c o m 第 2期 谭翔等u P L c u V 测定啤酒中亮蓝含量 3 5 的色谱条件 连续进样 6次 ， 记 录峰面积 ， 计算 得到 R S D I ． 1 8 ％， 表 明仪器精密度 良好。 2 ． 6 重复性试验 按照 2 - 3 的方法配制供试品溶液 6 份 ， 再按照 2 ． 1 的色谱条件进行测定， 记录峰面积， 计算得到 R S D I ． 2 5 ％， 表明该方法重复性 良好。 2 ． 7 稳定性考察 取供试品溶液， 按 2 ． 1 的色谱条件分别在 0 、 4 、 8 、 1 2 、 1 6 、 2 0 、 2 4 、 4 8 、 7 2 h进 样 ， 记 录峰面 积 ， 计 算得 到 R S D 1 ． 8 8 ％， 表明供试 品溶液在 7 2 h内稳定 。 2 ． 8 加样回收率 取 6 份同一啤酒样品溶液各 l m L ， 分别加入浓 度 为 1 ． 0 m g 、 5 ． 0 mg L - 、 1 0 mg L 『 、 1 5 mg I J _ 、 2 0 mg L ～、 2 5 mg L 的亮蓝 标准溶液 l m L， 摇匀 ， 按 2 ． 1的色 谱条 件 注 入超 高 液相 色谱 仪 ， 记 录峰 面 积。计 算 加 样 回 收率 ， 平 均 回收率 为 9 9 ． 2 1 ％， R S D 0 ． 4 9 ％。 结果见表 1 。 表 1 样 品加样回收率结果 2 ． 9 含量 测 定 医药论坛杂志 ， 2 0 0 4 1 8 3 8 4 9 3 8 5 2 取3 种 市 售 啤 酒 ， 按 照 2 _3 的 方 法 制 备 供 试 品 【4 】 张 敏 ， 肖 瑁 ， 劳 宝 ‘ 窆 效 液 谱 测 定 糕 点 中 亮 溶液 3份 ， 按照 2 ． 1的色谱条件进行测量 ， 结果都未 蓝的方法研究 [ J 1 ． 中国卫生检验杂志’2 0 1 2 ,2 2 o 检 钡 0 到凫 蓝 。 【 5 ]张钰，詹铭，季玉梅 ． 高效液相色谱法测定糕点中亮蓝 3 讨论 [J ] 中 国 预防 医 学 杂志， 2 0 1 2 ， 1 3 7 5 5 4 ． 5 5 6 ． 本文建立了超高效液相色谱快速测定啤酒中人 [ 6 1 陈鹏， 王微， 孙红 荧光光谱法快速测定饮料中亮蓝 [ J ] ． 工合成色素亮蓝含量的方法， 该方法简便准确、 灵敏 光谱实验室，2 0 1 2 ,2 9 6 4 9 一 。 2 度高 ， 避免了常规亮蓝含量测定时梯度洗脱带来的繁 [ 7 1冯骥，刘慧，赫春香 双波长分光光度法联合测定亮蓝 琐和比例不易调节等缺点， 可为食品和市场监管部 和苋菜红[ J 】． 安徽化工， 2 0 1 3 , 9 7 - 0 门对啤酒质量的监控提供理论依据和参考价值 。 【 8 ]张飞，郑家概，付强，等充气糖果中胭脂红酸的高 参考文献 效液相色谱测定 【 J J 广州化工 ， 2 0 1 3 ， 4 1 2 4 2 - 1 3 5 [ 1 1李祝，肖洋 ． 高效液相色谱法测定苦瓜啤酒中的亮蓝 【 J 1 ． 【 9 ]吴云 ，徐买成 ． 超高效液相色谱快速检测熟牛肉制品中 酿酒科技 ，2 0 0 8 4 1 1 2 1 1 3 ． 柠檬黄 、 胭脂红、日落黄 、 诱惑红的含量 饮食保健 ， [ 2 】龙洲雄 ，胡海山，万春花，等 ． 高效液相色谱法测定苦 2 0 1 5 1 o 5 - 6 瓜啤酒中亮蓝 [ J 1 食品科学 ，2 0 0 6 ，2 7 1 2 6 5 7 6 5 9 ． 【 1 0 】杨燕飞，张俊燕陈晓风 ． 五味子中非法添加苋菜红、日 [ 3 】王冬梅 ． 高效液相色谱法快速测定苦瓜啤酒中亮蓝 【 J J ． 落黄、亮蓝的检测 【J J 食品与药品，2 0 1 5 ，1 7 1 5 3 - 5 5 De t e r mi ne o f Br i l l i a nt Bl u e Co nt e n t i n Be e r b y UPLC- TUV T AN Xi a ng 1 ．C AOL i Y c } 1 ． G u i y a n g C i t y B u i l d i n g Ma t e ri a l s Q u a l i t y I n s p e c t i o n C e n t e r , G u i y a n g 5 5 0 0 0 9 ， C h i n a ； 2 ． S c h o o l o f P u b l i c He a l t h ． Gu i z h o u M e d i c a l Un i v e r s i t y ．, Gu i y a n g 5 5 0 0 2 5 C h i n a Abs t r a c t Ul t r a h i g h p e r f o r ma n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y wa s a p p l i e d t o d e t e r mi n e t h e c o n t e n t o f b r i l l i a n t b l u e i n b e e r wi t h AC QUI T Y UP L C BE H c o l u mn C 1 8 1 ． 7 m 2 ． 1 mm 5 0 ram Co l u mn ， mo b i l e p h a s e wa s me t h a n o l 一 0 ． 0 2 mo l ／ L a mmo n i u m a c e t a t e 3 9 6 1 ， fl o w r a t e wa s O ． 3 mL ／ mi n ， t h e wa v e l e n g t h w a s 6 2 8 n m， c o l u mn t e mp e r a t u r e w a s 1 6 ． 1 ， a n d s a mp l e s i z e w a s 5 L ． T h e r e s u l t s h o we d tha t b r i l l i an t b l u e h a d a g o o d l i n e a r r e l a t i o n s h i p b e twe e n 1 ． 0 2 5 mg ／ L． Th e a v e r a g e r e c o v e r y wa s 9 8 ． 7 ％． RS D 0 ．4 9 ％． Ke y wo r d s UP L C； b e e r ； b r i l l i a n t b l u e ； c o n t e n t d e t e c t i o n 学兔兔 w w w .x u e t u t u .c o m
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