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D1 菌株预处理水葫芦单相厌氧 发酵连续产沼气试验 * 杨晓瑞梁金花徐文龙朱建良 南京工业大学生物与制药工程学院, 南京 211816 摘要 利用高效降解纤维素的菌株 D1 对水葫芦进行预处理, 将其内部结构破坏后与活性污泥混合, 在不添加任何底 物情况下, 对比经过预处理与未经预处理水葫芦厌氧发酵产沼气的优化条件, 得出最佳优化条件。进一步将水葫芦厌 氧发酵产沼气的最佳优化条件进行放大试验, 结果表明 在 10 L 厌氧发酵罐内, 100 g 的水葫芦经 5 mL 含有 107孢子 的 D1 菌株菌悬液预处理 48 h 后, 与厌氧活性污泥在 30 ℃厌氧发酵 60 d 左右, 其产气效率明显优于未经预处理的水 葫芦, 达 15. 52 L, 平均产气量达155. 2 mL/g, 甲烷含量为63. 5。同时考察了反应器内的 pH 变化, 结果表明 pH 值相 对比较稳定, 适合甲烷菌产气。 关键词 水葫芦; 厌氧发酵; 沼气; D1 菌株 DOI 10. 13205/j. hjgc. 201402034 TEST OF CONTINUOUS BIOGAS PRODUCTION DURING ANAEROBIC FERMENTATION OF WATER HYACINTH PRETREATED BY STRAIN D1 Yang XiaoruiLiang JinhuaXu WenlongZhu Jianliang College of Biotechnology and Pharmaceutical Engineering,Nanjing University of Technology,Nanjing 211816,China Abstract Efficient degradation of cellulose Strain D1 was used for water hyacinth pretreatment to destroy its internal structure. After mixed it with the activated sludge with no additional substrate,pretreatment and without pretreatment conditions were compared to obtain optimum conditions for biogas production in water hyacinth anaerobic fermentation. The optimum conditions were amplified. The results showed that water hyacinth of 100 g pretreated by 107D1 strains of bacteria spore suspension of 5mL for 48 h,then mixed with anaerobic activated sludge of 30 ℃,anaerobic fermentation for about 60 d in the anaerobic fermentation reactor of 10 L,whose efficiency of gas production was significantly better than that without pretreatment. The amount of gas production was up to 15. 52 L,whose methane content was 63. 5. Changes of the pH in the reactor were also investigated,which showed that pH was relatively stable,suitable for gas production by the methane bacteria. Keywordswater hyacinth;anaerobic fermentation;biogas;strain D1 * 国家 “973” 项目计划重大项目 2009CB724700 ; 国家 “863” 计划重大 项目 2011AA02203 。 收稿日期 2013 -04 -15 0引言 近年来由于水葫芦的大量泛滥, 如何整治和利用 水葫芦, 将其变废为宝成为目前研究的热点[1- 3 ]。其 中, 利用水葫芦对污水中氮、 磷以及重金属的高吸附 性来净化水质, 再将净化水体后的水葫芦进行厌氧发 酵产沼气, 这条水葫芦资源化利用的新路线被大多数 学者看好, 此路线既能有效利用水葫芦, 又能改善环 境问题和能源问题 [4- 6 ]。 国内外学者对水葫芦厌氧发酵产沼气进行较多 研究。Yuk ih iko[7 ]在水葫芦化学元素分析基础上, 推算出水葫芦化学结构为 C6H1206. 8, 依据水葫芦成 分, 进一步推算出在厌氧条件下, 水葫芦厌氧发酵产 甲烷与二氧化碳的量分别为 14. 8、 40. 5 质量 比 , 换算成质量体积比分别为 207. 2, 206. 2 mL/g, 理论产气 沼气 潜力为 413. 4 mL/g, 其中甲烷含量 为 50. 1。周岳溪等 [8 ]研究了厌氧固体产酸相 - 上 流式折板生物膜产甲烷相组成的两相厌氧工艺处理 341 清洁生产与节能减排 Cleaner Production,Energy- Saving & Emission Reduction 鲜水葫芦的运行特点及机理, 试验结果表明, 该工艺 运行稳定, 平均产气量为 100 mL/g。气体中甲烷含 量高达 73. 3 ~83. 4。叶小梅等 [9 ]在实验室研究 了接种量、 发酵温度和微量元素对水葫芦厌氧发酵的 影响, 得到加大接种量有利于提高水葫芦厌氧发醇等 启动与产气率, 综合产气量、 原料降解率, 适宜接种比 例为 1, 55 ℃, 高温厌氧发酵有利于加快厌氧发酵进 程, 缩短发酵周期, 但总产气量及原料降解率与 35 ℃ 无区别, 添加适量的微量元素可以提高7 d 总产气量。 本研究主要利用在腐烂的水葫芦茎叶上筛选到 的 D1 菌株, 对水葫芦进行预处理破坏其内部结构, 再将其与污泥混合厌氧发酵制备沼气。通过小试对 水葫芦预处理条件和水葫芦厌氧发酵工艺条件进行 优化, 提高水葫芦单相厌氧反应的产气效率和产气启 动期。将优化条件扩大至 10 L 厌氧发酵反应器, 并 对水葫芦单相厌氧发酵连续产沼气进行研究。 1试验部分 1. 1材料 水葫芦水葫芦取至南京工业大学江浦校区, 将 打捞的水葫芦洗净烘干后备用。 活性厌氧污泥 污泥取自南京工业大学江浦校区 沼气池。 D1 菌株 从南京工业大学江浦校区打捞的腐烂 水葫芦的茎叶上筛选得到。利用传统分类学方法、 电 子显微镜观察、 18S rDNA 和序列的测定以及系统发 育分析对菌株 D1 进行分类鉴定。鉴定其为青霉属 真菌斜卧青霉 penicillium decumbens 。CMC 酶活最 高为 2. 032 μmol/ minmL , 滤纸酶活 FPA 最高为 1. 548 μmol/ min mL 。还原糖浓度 10 d 达到最高 为 2. 263 mg/mL, 2 周左右水葫芦的降解率达到 39. 13。在250 mL 三角瓶中装水葫芦培养基75 mL 30 , 按5接种, 在30 ℃、 摇床转速 150 r/min 的 培养条件下, 发酵产酶, CMCase 最高可达到 2.232 μmol/ min mL , FPA 为 1. 783 μmol/ min mL [10 ]。 1. 2试验装置 1. 2. 1小试发酵装置 采用500 mL 三角锥形瓶作为小试发酵装置。将 三角锥形瓶置于恒温水浴锅中, 调节至所需温度, 将 水葫芦和活性污泥按比例加入后密封反应, 厌氧发酵 产生的气体经过导气软管进入倒置的集气瓶, 集气瓶 预先装满饱和食盐水, 气体进入后, 饱和食盐水通过 导液软管排入量筒, 读取量筒的液面示数, 确定排出 的液体量, 即反应产生的气体量。 1. 2. 2放大发酵装置 采用有效容积为 10L 的厌氧发酵罐进行水葫芦 连续厌氧发酵放大试验, 该装置可以进行发酵液 pH 及温度的在线测量。温度由循环水浴控制, 气体同样 以排水法收集。 1. 3试验方法 1. 3. 1小试厌氧发酵条件优化 水葫芦经过简单切分或粉碎处理后, 与活性污泥 混合, 在不添加任何底物的条件下, 将其一次性投料 于小试发酵装置中进行为期 60 d 的厌氧发酵, 改变 发酵温度和污泥的添加量等条件, 每天记录产气量, 通过单因素试验法研究污泥接种率、 水葫芦粉碎程度 和发酵温度等对水葫芦厌氧发酵产沼气的影响, 得到 水葫芦发酵产沼气的优化条件。 1. 3. 2预处理条件选择 利用高效降解纤维素的 D1 菌株对水葫芦进行预处 理, 并将预处理后的水葫芦与污泥按照条件优化的最适 比例添加到发酵装置中, 在适宜的发酵温度下对其预处 理时间、 D1 菌株接种量和发酵反应的 pH 值进行研究, 考察预处理与否对水葫芦厌氧发酵产沼气的影响。 1. 3. 3优化条件放大试验 采用一次投料方式进行为期 60 d 的厌氧发酵。 每天记录产气量, 测定发酵前后料液 pH 值, 并采用 排水法收集气体。通过对比经 D1 菌株预处理的水 葫芦和没有添加 D1 菌株的水葫芦产气情况, 考察 D1 菌株对水葫芦的预处理效果和实际应用价值。 1. 4分析测定方法 1. 4. 1气体组份分析 水葫芦厌氧发酵产生的气体由 GC 检测, 检测条 件为 1 mL 定量环;3 mm 0. 5 mm 长 2 m 不锈钢 柱, 填料为 porapak Q 80 ~ 100 目; 进样口气化温度 80 ℃, 柱温 90 ℃, 热导检测器 TCD 检测温度为 180 ℃; 载气为高纯 He, 流量 15 mL/min, 通过外标法 定量分析气体中各组份的含量。 1. 4. 2pH 值测定 发酵液 pH 值由配备 E- 201- C 型 pH 复合电极的 PHS- 3C 型精密 pH 计测定。 2结果与讨论 2. 1水葫芦单相厌氧发酵小试试验条件优化 2. 1. 1污泥接种率对水葫芦厌氧发酵产沼气的影响 将 20 g 水葫芦粉末 100 目 与强化活性污泥按 441 环境工程 Environmental Engineering 2∶ 1、 1∶ 1、 1∶ 2的比例混和, 放入单相厌氧反应器中, 30 ℃下发酵反应 60 d, 结果如图 1 所示。 图 1不同接种率对厌氧发酵产沼气的影响 Fig.1Effects of different inoculation ratio on biogas production 由图 1 可以看出 在整个反应期内, 产气量并不 均匀。各个反应达到最大产气率的时间不同, 基本发 酵完全的时间也不同。在反应初期的产气量是由活 性污泥自身含有的营养基质产气, 停滞 3 ~ 4 d 后进 入水葫芦产甲烷阶段, 50 d 后, 基本发酵完毕, 最大产 气率发生在 20 ~30 d, 总产气量最高为接种率 1∶ 1的 发酵底物, 60 d 共产气 1. 955 L。 菌种利用营养源生长的外部条件有区别。污泥 量较少时, 水葫芦发酵缺乏足够的菌量, 产气量也相 应减少, 当污泥量较多时, 污泥中大量的菌群需要较 多的营养基质和生长因子, 在产甲烷后期, 发酵底物 由于营养因子的缺乏, 限制了厌氧发酵产气。因此, 加入合适的污泥配比, 可缩短产气启动期。水葫芦与 污泥配比在 1∶ 1 TS 比 时较适宜。 2. 1. 2水葫芦粉碎程度对水葫芦厌氧发酵产沼气的 影响 将采摘后的水葫芦晒干后, 对其进行简单切分和 粉碎, 在单相厌氧反应器中, 将不同粉碎程度的 20 g 水葫芦 30 ℃ 下发酵反应 60 d 左右, 结果如图 2 所示。 由图 2 可以可知 简单切分后的水葫芦在 30 ℃ 与活性污泥混合厌氧发酵 60 d, 产气量为 2. 14 L, 比 同等条件下水葫芦粉发酵产气提高 10左右。 由此可知, 粉碎程度对厌氧生物反应也有重要的 影响, 一般来说, 颗粒越小, 微生物和有机物接触的面 积越大, 有利于厌氧生物反应的进行。但是对简单切 分和粉碎的水葫芦进行比较后发现完全粉碎后并没 有加速整个反应的进行, 产气速度和总产气量反而略 图 2水葫芦粉碎程度对厌氧发酵产沼气的影响 Fig. 2Effects of different chopping size of water hyacinth on biogas production 有降低。 分析认为, 当粉碎程度大时, 有利于产酸菌的生 长, 此时它们占主导地位, 发酵液中的 pH 值比较低, 不利于产甲烷菌的生长, 因此产气速率和产气量有所 降低。 2. 1. 3发酵温度对水葫芦厌氧发酵产沼气的影响 将 20 g 水葫芦进行简单切分和强化活性厌氧污 泥分别在 10, 30 和 50 ℃温度下进行厌氧发酵 60 d, 结果如图 3 所示。 图 3发酵温度对厌氧发酵产沼气的影响 Fig. 3Effects of different temperature on biogas production 由图 3 可以看出 在发酵温度 30 ℃, 简单切分, 接种率为 1∶ 1时, 产气效果明显优于同等条件下10 ℃ 与 50 ℃的产气量。30 ℃左右, 水葫芦单相间歇厌氧 发酵共产沼气 2. 14 L。 2. 1. 4预处理时间对 D1 菌株预处理水葫芦厌氧发 酵产气的影响 将 1 mL 含有 107孢子的菌悬液接种到灭菌过的 20 g 干水葫芦中, 发酵底物的固液比为 1∶ 1, 预处理 时间分别为 0, 24, 48, 72, 96 h; 将预处理后的水葫芦 541 清洁生产与节能减排 Cleaner Production,Energy- Saving & Emission Reduction 与强化过的活性污泥 30 ℃混合厌氧发酵 60 d, 结果 如图 4 所示。 图 4预处理时间对厌氧发酵产沼气的影响 Fig. 4Effects of water hyacinth pretreatment time on biogas production 水葫芦和活性污泥混合厌氧发酵产沼气的过程 是多种菌群协同作用的结果, 主要为水解菌和产甲烷 菌。D1 菌株对水葫芦有较好的水解作用, 能与产甲 烷菌协同反应, 发酵产生沼气。经实验发现, D1 菌株 分别预处理 0, 24, 48, 72, 96 h 后, 水葫芦产气效率各 不相同, 其中预处理 48 h, 水葫芦厌氧发酵产气效果 最好, 60 d 共产气 2. 83 L。每克水葫芦产气为 141. 5 mL。与未处理过的用于发酵的水葫芦相比, 产 气效率较高的时间段有所提前, 最高产气率提前至 10 ~20 d, 最大产气量也提高了约 32。 2. 1. 5接种量对 D1 菌株预处理水葫芦厌氧发酵产 气的影响 分别将含有 107孢子的菌悬液 0. 5, 1, 2 mL 接 种到经过灭菌的 20 g 干水葫芦粉中, 发酵底物的固 液比为 1∶ 1, 采用最优预处理时间处理后与强化过 的活性污泥在 30 ℃混合厌氧发酵 60 d, 结果如图 5 所示。 图 5 D1 菌株接种量对厌氧发酵产沼气的影响 Fig.5Effects of strain D1 inoculation ratio on biogas production D1 菌株预处理水葫芦后, 在整个发酵体系中成 为优势菌株。预处理之后的水葫芦与强化活性厌氧 污泥混合发酵起初, 发酵罐内含有一定的氧气, 好氧 D1 菌株仍占有优势地位, 而活性污泥中的产甲烷菌, 受到一定的抑制。D1 菌株作为水葫芦前期厌氧发酵 的水解菌, 有着十分重要的作用, 但在发酵后期, 在厌 氧发酵罐的密闭体系中, 含氧量的缺乏使 D1 菌株的 活性受到抑制, 严格厌氧的甲烷菌活性增强, 开始产 气。因此, D1 菌株的接种率对水葫芦预处理效果有 十分积极的作用, 过低的接种率不利于水葫芦的水 解, 同时一定量的 D1 菌株可以迅速消耗发酵罐内的 氧气, 对于发酵罐的氧化还原电位的控制起到了十分 积极的作用。但同时过高的接种率, D1 菌株在发酵 体系中生长旺盛, 过量的消耗了反应体系中的基质和 生长因子, 生长因子的缺乏会抑制后期甲烷菌的活 力, 影响产气效果。实验表明, 接种量为 1mL 含有 107孢子的菌悬液, 产气量达到最高, 为 2. 83 L。 2. 1. 6pH 值对 D1 菌株预处理水葫芦厌氧发酵产 气的影响 菌株 D1 是一株产酸性纤维素酶的斜卧青霉, 因 此, 菌株 D1 对水葫芦预处理过程中 pH 值的选择范 围偏酸性。将 D1 菌株与水葫芦按最适接种率接种, 调节水葫芦发酵液的 pH 值为 4. 0、 5. 0、 6. 0, 和自然 pH, 采用最优预处理时间处理后与强化活性污泥在 30 ℃混合厌氧发酵 60 d, 结果如图 6 所示。 图 6 pH 值对厌氧发酵产沼气的影响 Fig.6Effects of pH value on biogas production 当预处理条件 pH 值在 4. 0、 5. 0、 6. 0 及 pH 值自 然的条件下, 30 ℃, 预处理48 h 后, 发现 pH 值为6. 0 及 pH 值在自然条件下的预处理, 产气效率相似, 其 中 pH 值为 6. 0 的发酵条件的产气效率略高, 但考虑 到调节 pH 值采用的缓冲液有一定的成本, 因此, 将 641 环境工程 Environmental Engineering pH 值调节到 6. 0 不具有实际的应用价值, pH 值不作 调整即可, 为 6. 8 ~7. 2。 2. 2水葫芦单相厌氧发酵产气放大试验 通过考察恒温条件水葫芦单相间歇厌氧发酵规 律, 确定水葫芦单相间歇厌氧发酵放大产气试验的基 本参数, 将预处理后水葫芦与活性污泥放大置于10 L 的厌氧发酵罐中反应, 验证预处理后水葫芦与活性污 泥的产气效果和反应器的稳定性。 2. 2. 1水葫芦的单相厌氧发酵产气 参考小试水葫芦单相间歇厌氧发酵产气的条件 参数, 在10 L 厌氧发酵罐中将100 g 水葫芦进行简单 切分, 在温度为 30 ℃条件下, 用 5 mL 含有 107孢子 的菌悬液 D1 菌株恒温发酵 48 h 后, 再按 1∶ 1的污泥 接种率与强化活性污泥在厌氧发酵罐中进行厌氧发 酵 60 d, 同时采用未预处理的水葫芦进行对比试验, 结果如图 7 所示 图 7水葫芦单相厌氧发酵放大产气试验 Fig.7Amplification experiments on biogas production of water hyacinth anaerobic fermentation 由图7 表明 经过 D1 菌株预处理后的水葫芦在放 大实验中, 其产气效率远远高于未预处理的水葫芦, 反 应器运行60 d, 预处理后的水葫芦实际产气量为15. 52 L, 水葫芦平均产气量达到 155. 2 mL/g, 甲烷含量为 63. 5。高出未预处理的水葫芦实际产气量77。 2. 2. 2单相厌氧发酵反应器内 pH 值变化 发酵体系中 pH 值的变化主要随发酵液中累积 的有机酸浓度的变化而变化, 有机酸浓度的提高可以 为甲烷菌提供必要的发酵底物, 但过低的 pH 值会抑 制甲烷菌的活性。单相厌氧发酵反应器的 pH 值总 体比较稳定, 基本符合甲烷菌产气的 pH 值范围, 在 6. 6 ~7. 5。整个反应器运行比较稳定 图 8 。 3结论 1 小试利用 D1 菌株预处理水葫芦厌氧发酵产 图 8发酵体系中的 pH 值变化 Fig. 8Changes of pH in fermentation system 沼气的最佳条件为 1 mL 含有 107孢子的 D1 菌株菌 悬液与 20 g 经简单切分水葫芦混合, 30 ℃恒温预处 理 48 h, 再与活性污泥 1∶ 1混合, 在自然 pH 值条件 下, 30 ℃恒温厌氧发酵 60 d, 产气最高, 达 2. 83 L, 水 葫芦的平均产气量为 141. 5 mL/g。 2 对水葫芦厌氧发酵产沼气进行放大试验, 考 察产气效率和反应器稳定性, 研究结果表明 在 10 L 的厌氧发酵器内, 100 g 简单切分水葫芦与5 mL 含有 107孢子的 D1 菌株悬液预处理 48 h, 与厌氧活性污 泥 1∶ 1混合, 在 30 ℃恒温厌氧发酵 60 d, 结果表明 经过 D1 菌株预处理的水葫芦产气效率明显优于未 经预处理的水葫芦, 产气量达 15. 52 L, 甲烷含量为 63. 5。同时考察了反应器内的 pH 值变化, pH 值 相对比较稳定, 适合甲烷菌产气, 水葫芦的平均产气 量达 155. 2 mL/g。 参考文献 [1]Wang Zanxin, Margaret M C. 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Energy Conversion and Management, 2002, 43 1301- 1310. 下转第 109 页 741 清洁生产与节能减排 Cleaner Production,Energy- Saving & Emission Reduction 图 2二恶英类化合物典型结构 Fig.2Typical structure of dioxin- like compounds 在污染物解析及二恶英消除系统中, 吸附在活性 炭中的二恶英被分解, 分解的原理是将活性炭加热到 450 ℃, 破坏苯环间的氧基, 使之发生结构转变。 2. 3. 4除尘及脱除重金属机理 活性炭的除尘功能与常规过滤一样, 活性炭移动 层通过碰撞 ≥1 μm 、 遮挡及扩散捕集<1 μm 来 实现。 在常见的重金属元素中, 活性炭可将汞金属吸附 在活性炭表面, 与被吸附的 H2SO4发生反应, 以 HgSO4的形式固定下来; 其他微量重金属也通过活性 炭的捕集、 吸附功能脱除。 2. 4烧结污染物排放浓度 环保排放结果见表 2。 表 2环保排放结果 Table 2Environmental emissions results 项目 ρ SO2/ mg m -3 ρ NOx / mg m -3 ρ 颗粒物 / mg m -3 ρ 二恶英 / 10 -6mg m-3 活性炭处理后31. 7596. 614. 450. 21 GB 286622012180300400. 5 2. 5硫酸制备系统系统 活性炭所吸附的气体经解析塔解析后排出的烟 气中 SO2体积比大于 20 干 。因此, 回收烟气中 的 SO2可生产浓度为 98的成品硫酸, 彻底治理 SO 2 对环境的污染, 变废为宝。 富集烟气制酸采用喷淋塔 泡沫柱洗涤装置 3 1四段转化、 一次干燥、 两次吸收的制酸工艺。 由于泡沫柱洗涤装置对粒度的关系曲线较其他 洗涤器平坦, 因此喷淋塔 泡沫柱洗涤装置可有效地 进行分级洗涤, 以较低的能量获得较高的洗涤效率。 干燥和吸收循环酸冷却均采用了阳极保护酸冷 却器。为回收 SO3烟气中的热量, SO3冷却器设置为 热管式省煤器, 冷却烟气后的热水可送往废热锅炉。 转化器一次气、 二次气各设置一台加热电炉, 可用于 转化系统开车时升温。 3结束语 活性炭烧结机烟气协同处理技术实现了多种有 害成分的同时去除, 完全满足国家标准, 并为烧结机 烟气实现循环经济产业链提供了示范。烧结烟气活 性炭法脱硫脱硝与制酸技术为全国冶金行业提供了 成功范例, 值得推广应用。 参考文献 [1]柴田宪司, 山田森夫, 森本启太. 活性炭移动层式烧结机烟气处 理技术[J]. 山东冶金, 2010, 32 3 1- 2, 7. 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