离子色谱-电感耦合等离子体质谱法测定乳粉的汞形态_林立.pdf

2014 年 5 月 May 2014 岩矿测试 ROCK AND MINERAL ANALYSIS Vol． 33，No． 3 390 ～396 收稿日期 2013 －11 －02; 接受日期 2013 －11 －29 基金项目 国家质检总局科技计划项目 2012QK013 ; 质检公益性行业科研专项 201210116 作者简介 林立， 高级工程师， 博士研究生， 主要从事分析化学的研究。E- mail linli77422 aliyun． com。 文章编号 0254 －5357 2014 03 －0390 －07 离子色谱 － 电感耦合等离子体质谱法测定乳粉的汞形态 林立1， 2，王琳琳2，孙海波2，孙继红1 1． 北京工业大学，北京 100022;2． 国家食品质量安全监督检验中心，北京 100094 摘要 对于乳粉的汞形态分析， 由于基质的复杂性， 有机汞非 常容易与样品中蛋白质上的巯基结合， 形成稳定的络合物， 在 前处理过程中须保证各形态提取完全且各形态之间不会发生 相互转化， 因此样品前处理是汞形态分析的难点; 同时乳粉中 汞含量极低， 对方法检出限提出了更高的要求。本文通过优化 样品前处理过程， 建立了离子色谱 － 电感耦合等离子体质谱测 定乳粉中三种汞形态 二价汞、 甲基汞、 乙基汞 的方法。实验 采用多种复合酶 蛋白酶、 脂肪酶、 淀粉酶 对乳粉基质中的蛋 白、 脂肪、 淀粉进行解离， 采用 L － 半胱氨酸 － 盐酸 － 甲醇的混 合溶液作为提取剂进行超声提取， 样品过 RP 固相萃取小柱去 除杂质后用 C18 色谱柱 5 μm， 4． 6 mm 150 mm 进行分离， 流动相采用 10 mmol/L 乙酸铵 －0． 12 L － 半 胱氨酸 －5甲醇混合溶液进行淋洗， 5 min 内即可实现三种汞形态的基线分离。二价汞、 甲基汞和乙基汞的 加标回收率在 79． 9 ～111． 2之间， 检出限分别为0． 5 μg/kg、 0． 6 μg/kg、 0． 9 μg/kg。实际样品分析表明， 汞总量很低的乳粉， 汞各形态的提取率也能达到 70 以上， 能够满足检测要求。本方法在样品前处理过程 中采用酶解的方式解离复杂基体中的汞形态， 提高了提取率至 80 以上; 仪器分析方面采用甲醇作为增敏 剂， 提高了检测灵敏度， 适用于乳粉样品中痕量汞形态的检测。 关键词 乳粉; 汞形态; 解离; 超声提取; 离子色谱法; 电感耦合等离子体质谱法 中图分类号 TS252． 5; O614． 243文献标识码 A 汞化合物的生物化学行为和毒性与它们的化学 形态密切相关， 仅仅从总量来评价其安全性是不科 学的。有机汞的毒性大于无机汞， 其中甲基汞的毒 性最强。由于甲基汞具有亲脂性、 生物积累效应和 生物放大效应， 其毒性是无机汞的几百倍 ［1 ］。有机 汞化合物在农业中常用作杀虫剂和杀菌剂， 很容易 进入生物食物链 ［2 ］， 造成食品安全事件频频发生， 例如 2012 年奶粉的汞超标事件。对于汞形态分析， 应属水产品的报道较多， 在这些基体中汞常以甲基 汞的形态存在; 而对乳粉样品的汞形态研究还未见 报道。对于乳粉样品， 由于基质的复杂性， 乳粉中蛋 白、 脂肪、 乳糖等有机物中所含的巯基与汞化合物的 结合非常牢固， 形成稳定的络合物， 要将汞的各种形 态从结合态中完全解离出来是汞形态分析工作的重 点， 同时在前处理过程中须保证各形态提取完全且 各形态之间不会发生相互转化， 因此， 样品前处理是 汞形态分析的难点。 乳粉中汞含量极低， 也对汞形态分析的检出限 提出了更高的要求。目前汞形态分析的方法很多， 对汞形态的分离常采用色谱分离技术， 如气相色 谱 ［3 －4 ］、 高效液相色谱［5 －11 ］、 离子色谱［12 ］、 毛细管电 泳分离 ［13 －14 ］等。常用的检测手段有电化学检测器 ECD 、 原子吸收光谱仪 AAS ［3 ］、 原子荧光光谱 仪 AFS ［5， 8 －10， 15 ］、 电感耦合等离子体发射光谱仪 ICP － AES 、 电感耦合等离子体质谱仪 ICP － MS ［4， 6 －7， 11 －12， 14 ］等。各种分离技术均有优缺点。 093 ChaoXing 如采用气相色谱进行分离， 在前处理过程中需要衍 生化， 操作较为繁琐; 采用毛细管电泳分离， 设备普 及率不及其他的分离手段。在检测手段方面， ECD、 AAS、 AFS、 ICP － AES 的检测灵敏度均不及 ICP － MS; 且 ICP － MS 具有很高的灵敏度和很好的选择 性， 对于汞的分析， 选择丰度比最高的 202 作为采集 的质量数， 在乳粉基质中无质谱干扰， 与离子色谱联 机无需特别的接口， 硬件条件很容易实现。 本文建立了一种离子色谱 － 电感耦合等离子体 质谱 IC －ICP －MS 测定乳品中汞形态的分析技术。 实验室重点优化了样品的前处理方法， 采用多种复合 酶 蛋白酶、 脂肪酶、 淀粉酶 对奶粉基质中的蛋白、 脂 肪、 淀粉进行解离， 以 L － 半胱氨酸、 盐酸和甲醇的混 合溶液作为提取剂进行超声提取， 样品过 RP 固相萃 取小柱去除杂质后导入 Agilent Eclipse XDB － C18 色 谱柱 5 μm， 4．6 mm 150 mm 进行分离， 流动相采用 10 mmol/L 乙酸铵 －0． 12 L － 半胱氨酸 －5 甲醇 混合溶液进行淋洗， 最后通过 ICP － MS 对三种汞形 态 二价汞、 甲基汞、 乙基汞 进行定量。该方法可为 乳粉中汞的富集形态研究提供数据支持。 1实验部分 1． 1仪器及工作条件 ICS1500 型离子色谱仪 美国 Thermo 公司 。 离子色谱条件 Agilent Eclipse XDB － C18 色谱柱 5 μm， 4． 6 mm 150 mm ; 淋洗液 10 mmol/L 乙酸 铵 －0． 12L － 半胱氨酸 － 5 甲醇混合溶液; 流速 1 mL/min; 进样量 20 μL。 Agilent 8800 电感耦合等离子体质谱仪 美国 Agilent 公司 。同心雾化器; 石英雾化室 半导体控 温 2 0． 1 ℃; 屏蔽矩。质谱仪参考条件见表 1。 色谱柱与 ICP － MS 相联的管线距离不超过 0． 5 m。 DMA80 测汞仪 法国麦尔斯通公司 。 表 1 ICP － MS 仪器工作条件 Table 1Working parameters of the ICP- MS instrument 工作参数设定条件工作参数设定条件 功率1500 W采样深度9．5 mm 载气 Ar 流量 0． 60 ～1．20 L/min 采集质量数 202Hg 辅助气 Ar 流量 与载气流量的总和 保持在 1．0 ～1． 2 L/min 之间 矩管 石英一体化， 2． 5 mm 中心通道 进样管内径＜0．2 mm灵敏度＞300 Mcps/ μg/g 采样锥铂锥积分时间0． 5 s 超纯水机 德国 Merk 公司 ， 超声波清洗器 KQ －500E 昆山市超声仪器有限公司 ， 水浴锅 北京 长安永创科学仪器有限公司 ， 冷冻离心机 湖南湘 仪设备有限公司 。 1． 2标准溶液与主要试剂 甲基汞 76． 6 μg/g 、 乙基汞 75． 3 μg/g 、 二 价汞 1000 μg/mL 标准溶液 购自中国计量科学研 究院。调谐溶液 10 ng/mL 锂、 钴、 钇、 铈、 铊混合标 准溶液 2 硝酸介质， 货号 Part5184 － 3566， 购自 美国 Agilent 公司 。 内标溶液 1． 0 μg/mL 铋标准溶液 2 硝酸介 质 购自中国计量科学研究院。 L － 半胱胺酸 纯度 ＞98， 美国 Sigma 公司 。 蛋白酶 活性≥400 units/mg， 美国 Sigma 公 司 ， 脂肪酶 活性≥700 units/mg， 美国 Sigma 公 司 ; α － 淀粉酶 活性 300 ～ 5000 units/mg， 天津市 福晨化学试剂厂 。 RP 固相萃取小柱 1 mL， 天津博纳艾杰尔科技 有限公司 。 甲醇 色谱纯， 百灵威公司 ， 硫代硫酸钠 分析 纯， 北京化学试剂厂 ， 盐酸 优级纯， 北京化学试剂 厂 ， 超纯水 电阻率18． 2 MΩcm ， 用于配制所有 标准溶液与样品溶液。 1． 3实验方法 称取约 0． 5 g 样品于 30 mL 锥形瓶中， 加入约 20 mL 水摇匀， 盖上瓶塞， 加入蛋白酶、 脂肪酶、 淀粉 酶各 0． 06 g 或配成溶液添加 ， 置于 37℃水浴锅中 酶解14 h 后， 加入30 g/L 的 L － 半胱胺酸1． 0 mL、 5 mol/L 盐酸 0． 5 mL 和甲醇 1． 25 mL 振荡提取 10 min。用水定容至 25 mL 比色管中， 5000 r/min 高速 离心后， 取上清液过 RP 小柱， 过 0． 45 μm 滤膜后导 入 C18 色谱柱 5 μm， 4． 6 mm 150 mm 进行分离， 采用电感耦合等离子体质谱仪进行定量， 同时准备 试剂空白。 2结果与讨论 2． 1样品前处理方法 检测乳制品中的汞形态， 样品前处理的难度大 于文献中常报道的海产品和环境样品的前处 理 ［3 －4， 8 －9， 11 －12， 16］。样品中有机汞非常容易和样品 中蛋白质上的巯基结合， 稳定地络合在蛋白上， 会随 着蛋白沉淀时沉淀下来或者是与蛋白质共同吸附在 分离色谱柱上， 无法洗脱， 无法被检测器检测。乳粉 基体主要由约 20 的蛋白质、 约 30 的脂肪和约 193 第 3 期林立， 等 离子色谱 － 电感耦合等离子体质谱法测定乳粉的汞形态第 33 卷 ChaoXing 50的乳糖组成 ［17 －18 ］。蛋白、 脂肪、 淀粉等物质如 果不在前处理过程中去除， 会对色谱柱造成不可逆 转的伤害。保证汞的各种形态在蛋白沉淀的过程中 不随着共沉淀而损失， 同时保持形态的稳定是本研 究工作的重点。 2． 1． 1样品中杂质的去除 乳粉样品基质复杂， 要采用色谱柱进行分离， 首 先需去除基质中的蛋白。乳粉样品的除蛋白方式通 常有以下几种 乙腈沉淀蛋白、 乙酸沉淀蛋白、 等电 点沉淀蛋白以及酶解沉淀的方式。乙腈沉淀蛋白体 系的样品中， 由于含有大量的乙腈 一般含量在 60左右 ， 采用 ICP － MS 检测时， 在溶剂流出的一 瞬间， 有机相含量太大， 等离子体条件发生了较大变 化， 造成 ICP － MS 氩火焰不稳定， 甚至熄灭， 无法正 常检测。乙酸沉淀蛋白体系虽然对于 ICP － MS 检 测而言不存在较大的问题， 但是由于现在的乳粉成 分较为复杂， 有些样品含有类似于增稠剂的食品添 加剂等物质， 采用乙酸沉降的方式很难沉淀下来， 并 不能适合于所有的奶粉基质。等电点沉淀蛋白体系 适用于所有基质的乳粉， 但是操作过程较为繁琐， 需 要对每个样品调其 pH 值， 不适合大批量样品的检 测。 本实验室选择酶解的方式去除杂质， 对酶的用 量、 酶解时间进行了条件摸索。针对乳粉基质， 实验 室采用蛋白酶、 脂肪酶和淀粉酶组成的复合酶对乳 粉进行酶解。复合酶的用量对酶解效果起着很重要 的作用。一般而言， 底物含量越高酶解的效果越好， 但是酶本身也是一种蛋白质， 其加入量过多也会吸 附各种形态的汞， 降低回收率。 在酶的用量实验中， 称取约0． 5 g 样品于30 mL 具塞三角瓶中。加入蛋白酶、 脂肪酶和淀粉酶的含 量分别由 0． 02 g 逐级增加到 0． 1 g， 对酶解效果进 行评价。当各种酶的含量分别为 0． 06 g 时， 酶解效 果较好。同时将酶解后的溶液过 0． 45 μm 滤膜和 RP 小柱去除其中的蛋白， 得到的样液采用测汞仪检 测总汞含量得出了相同的结论。在此条件下， 总汞 的含量最大， 酶解效果最好， 汞从蛋白基质中的解离 效果最好。 在酶解时间实验中， 当酶解时间达到 14 h 以上 时， 酶解基本完成。一般在 pH ＞4． 5 的条件下进行 酶解较好， 实验室测试了0． 5 g 乳粉溶解在约20 mL 的超纯水中时 pH 6． 5， 满足酶解的条件， 无需调节 pH 值。酶解温度则一般选择细菌的培养温度 37℃。 2． 1． 2提取溶液的选择 对于汞形态分析， 不同的样品基体需采用相应 的提取方法， 常用的提取方法有酸提法、 碱提法以及 超临界流体萃取等 ［16 ］。实验室对于酸提取和碱提 取两种提取方法进行了考察， 样品溶液经处理用 IC － ICP － MS 进行形态分析。选择不含汞的乳粉样品 在基质上加标试验， 考察汞的各种形态的提取率 回收率 。 从表 2 的实验结果可以看出， 对于不同的汞形 态， 不同提取体系的提取率各不相同。采用体系② 进行提取， 二价汞和甲基汞的回收率很高， 而乙基汞 的回收率在 80 左右。当提取液中有硫代硫酸钠 时， 可以提高乙基汞的回收率， 即采用体系①进行提 取， 这时乙基汞的回收率明显增加， 接近 100， 但 是二价汞的回收率极低， 无法满足检验的要求。体 系③是碱性体系， 汞各形态的回收率均较低， 显然不 适合应用。综合考虑三种体系中汞形态的回收率结 果， 本文确定采用体系② 即 0． 12 L － 半胱氨酸 溶液 0． 1 mol/L 盐酸 5甲醇 进行提取。 表 2不同提取液对汞形态的回收率 Table 2The recovery rate of Hg speciation by different extraction systems 汞形态 回收率 体系① 0． 12 L － 半 胱 氨 酸 溶 液 0．1 盐酸 0． 1 硫代硫酸钠溶液 5甲醇 体系② 0． 12 L － 半胱氨酸溶 液 0． 1 mol/L 盐酸 5甲醇 体 系 ③ 50 mmol/L 氢氧 化钠碱 性 溶 液 5甲醇 二价汞12．198． 555． 3 甲基汞100．4102．344． 9 乙基汞97．680． 639． 4 2． 1． 3提取方式的选择 一般溶剂提取采用超声、 振荡、 恒温水浴等方 式。由于振荡法和恒温水浴法的提取时间较长， 实 验室对超声提取进行了条件摸索。将酶解后的溶液 加入 L － 半胱氨酸、 盐酸和甲醇混合溶液进行萃取， 萃取时间分别设定为 0、 5、 10、 20、 30、 40、 50、 60 min。 从图 1 可以看出 10 min 后提取量没有明显的变化， 最终确定超声时间选择为10 min。同时在实验过程 中发现， 超声时间越长， 乙基汞逐渐转化为二价汞， 所以超声时间也不宜太长。 2． 2离子色谱 － 质谱联机检测条件 2． 2． 1色谱柱和淋洗液的选择 进行汞形态分析， 常用反相高效液相色谱柱作 293 第 3 期 岩矿测试 http ∥www． ykcs． ac． cn 2014 年 ChaoXing 图 1超声时间对提取率的影响 Fig． 1Effect of ultrasonic extraction time on extraction rate of Hg speciation 为分离手段。在反相键合色谱中， 固定相的极性小 于流动相的极性， 适合于分离非极性、 极性和离子型 化合物 ［16 ］。本实验选择 C18 柱作为汞形态的分离 柱， 选择适当的离子对试剂与汞化合物反应， 生成非 极性化合物在反相柱上进行分离。 实验室还考察了 L － 半胱氨酸、 四丁基溴化铵、 溴化钾体系作为离子对试剂对汞形态进行洗脱。 L － 半胱氨酸的洗脱能力明显强于四丁基溴化铵和 溴化钾， 同时 L － 半胱氨酸也作为一种络合剂， 它的 含量还会影响汞形态的峰形。当 L － 半胱氨酸的含 量较低时， 汞的各种形态的保留时间较长， 峰形拖 尾; 当汞含量增加到一定程度时， 二价汞与甲基汞的 分离效果变差， 峰形却越来越尖锐; 然而汞含量越 高， 带入的盐类不仅仅是容易在 ICP － MS 的截取锥 锥口沉积， 同时对色谱柱的损伤也较为严重。当 L － 半胱氨酸的浓度在0． 12时， 能在5 min 内完成 分离。 甲醇在检测过程中有着双重的作用。①淋洗液 中甲醇的加入会影响到极性， 甲醇含量越大， 汞的各 种形态的保留时间越短; 当甲醇浓度增加到 10 时， 二价汞与甲基汞很难实现完全的基线分离， 因此 要求甲醇的浓度在 10 以下。②汞元素用 ICP － MS 测试的灵敏度较低， 因为汞的第一电离能为 1007． 1 kJ/mol， 电离效率较低。因此， 甲醇作为一 种有机试剂， 还对 ICP － MS 检测具有增敏效应， 增 敏效应产生的原因可能是电离的碳离子与部分未电 离的目标离子之间发生了电荷转移效率， 提高了汞 的电离效率， 增强了灵敏度 ［19 －20 ］。但是当甲醇的含 量增加到过量的程度， 会使等离子体炬的参数发生 较大变化， 反而增加了电离的负担， 灵敏度又会下 降。实验数据也证明了这一点。图 2 为不同的甲醇 浓度条件下， 10 μg/L汞溶液的灵敏度的变化。当甲 醇含量约 5时， 汞的灵敏度最高， 这与色谱分离要 求的甲醇含量在 10以下的条件相吻合， 最终选择 甲醇的浓度为 5。 对分离条件进行优化后， 在 5 min 内能实现三 种汞形态的基线分离 图 3 。 图 2甲醇对汞检测灵敏度的影响 Fig． 2Effect of methanol on detection sensitivity of Hg 图 3IC － ICP － MS 联机检测汞的各种形态的分离色谱图 浓度以汞计均为 10 μg/L Fig． 3Chromatogram of mercury speciation by IC- ICP- MS 2． 2． 2质谱分析条件的选择 汞在自然界共有 6 个同位素， 其中丰度比较高 的同位素有199Hg、 200Hg、201Hg、202Hg， 丰度比分别为 16． 87、 23． 10、 13． 18、 29． 86， 这些质量数分 别容易受到183W16O、 184W16O、185Re16O、186W16O 等多 原子离子的干扰， 然而可能干扰的这些物质几乎不 存在于食品基体中， 所以实验室选择了丰度比最高 的 202 作为采集的质量数， 样品基质中无质谱干扰。 2． 3方法检出限和线性范围 将浓度为 0． 5、 1． 0、 2． 0、 5． 0、 10、 20 μg/L的二 393 第 3 期林立， 等 离子色谱 － 电感耦合等离子体质谱法测定乳粉的汞形态第 33 卷 ChaoXing 价汞、 甲基汞和乙基汞系列标准溶液进行了线性范 围的测定， 三条曲线的线性方程、 相关系数见表 3。 调谐仪器到最佳状态， 进样量 10 μL。选择汞本底 值较低的试剂进行实验， 保证较低的基线背景。在 最终确定的仪器条件下， 奶粉中的二价汞、 甲基汞和 乙基汞的仪器检出限分别为 0． 01 μg/L、 0． 012 μg/L、 0． 018 μg/L 见表 3 。对于乳粉样品如果稀 释倍数是 50 倍时， 固体样品的检出限分别为 0． 5 μg/kg、 0． 6 μg/kg、 0． 9 μg/kg。相关文献［ 7］ 采用高 效液相色谱 － 电感耦合等离子体质谱 HPLC － ICP － MS 测定二价汞、 甲基汞、 乙基汞， 本文采用的 IC － ICP － MS 仪器检出限与 HPLC － ICP － MS 方法相 比较降低了一倍， 达到了较好的检测水平， 完全满足 乳粉中痕量汞形态检测的要求。 表 3线性方程、 线性范围和仪器检出限 Table 3Linear equations，linear range and the detection limit of the instrument 汞形态线性方程 相关系数 r2 线性范围 μg/L 仪器检出限 μg/L 二价汞 y 20512x －1268． 71． 00000．5 ～20． 00．01 甲基汞y 14778x －586．90． 99980．5 ～20． 00．012 乙基汞y 13671x －258．40． 99930．5 ～20． 00．018 2． 4加标回收率和精密度 为了考证汞的各形态的回收率情况， 选择样品 中汞含量低的样品进行加标回收实验。分别在样品 中加入2、 10、 20 μg/L 三个梯度的单标溶液， 各溶液 平行测定 6 次 n 6 。由表 4 可以看出， 无论是二 价汞、 甲基汞还是乙基汞， 加标回收率均在 79． 9 ～111． 2 之间， 精密度 RSD 在 1． 7 ～ 3． 2 之 间， 完全满足实验的要求。 表 4方法加标回收率和精密度 Table 4The spiked recovery and precision tests of the 物质名称 加标溶液 1 2 μg/L 平均 回收率 RSD 加标溶液 2 10 μg/L 平均 回收率 RSD 加标溶液 3 20 μg/L 平均 回收率 RSD 二价汞105．62．191．63． 195．22．1 甲基汞95．61． 797．52．2111．22．0 乙基汞79．92． 884．73．287． 33．2 3实际样品分析 采集 5 种实际乳粉样品， 用测汞仪测定乳粉的 总汞含量， 同时采用本工作建立的 IC － ICP － MS 方 法分析二价汞、 甲基汞、 乙基汞三种汞形态， 以三种 汞形态的加和值与总汞检测结果相比较得到提取 率， 分析结果列于表 5。从实验结果可以看出， 对于 汞总量很低的乳粉样品， 汞各形态的提取率也能达 到 70以上， 可以满足实验的要求。 采用本工作建立的 IC － ICP － MS 方法对鱼肉 国家标准物质 GBW 10029 进行测定， 总汞与甲基 汞的含量与相应的标准值吻合， 证明该方法准确可 靠 表 5 。 图 4 为某汞含量高的乳粉的色谱分离图， 可以 看出奶粉中汞的富集形态主要是二价汞和甲基汞。 表 5乳粉中汞的形态分析 Table 5Analytical results of mercury speciation in milk powder 样品名称 测汞仪测定的 总汞含量 mg/kg 汞形态的测定值 mg/kg 二价汞 甲基汞 以汞计 乙基汞 以汞计 汞形态的 提取率 乳粉10．352 0．3170．028未检出98．0 乳粉20．152 0．1320．015未检出96．7 乳粉30．036 0．034未检出未检出94．4 乳粉40．019 0．0110．003未检出73．6 乳粉50．025 0．021未检出未检出84．0 鱼肉标准物质 GBW 10029 0．86 标准值0．85 未检出 0．85 标准值0．84 未检出98．8 图 4乳粉样品中汞形态的色谱分离图 Fig． 4Chromatogram of Hg speciation in milk powder 4结语 乳粉的汞形态分析存在一些难点， 如由于基质的 复杂性造成提取率低、 乳粉中汞含量极低对方法检出 限提出了更高的要求， 本文建立的离子色谱 － 电感耦 合等离子体质谱方法解决了这些难点问题。该方法 前处理过程中采用酶解的方式解离复杂基体中的汞 形态， 提高了提取率， 仪器检测条件方面采用甲醇作 493 第 3 期 岩矿测试 http ∥www． ykcs． ac． cn 2014 年 ChaoXing 为增敏剂， 提高了检测灵敏度， 方法检出限低。 本方法可以应用于乳粉样品的实际检测工作。 而针对乙基汞的加标回收率 79． 9 ～ 87． 3 较 低的问题， 有待于进一步优化实验条件， 提高乙基汞 的检测能力。 5参考文献 ［ 1］金明华， 张晶， 刘晓梅， 王雯， 张洁， 石龙， 孙志伟． 甲基 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100094，China Abstract Sample pre- treatment difficulties arise during the analysis for mercury speciation in milk powder due to the complexity of the sample matrix． The organic mercury combines easily with sulfydryl of proteins in the matrix sample，to a stable complex． Therefore it is very important to ensure that all s are extracted completely and do not trans during the pre- treatment process． The with a lower detection limit was necessary because the concentration of mercury was too low． For this purpose，the for determination of mercury speciation inorganic mercury，methylmercury，ethylmercuryin milk was established by ion chromatography inductively coupled plasma mass spectrometry with optimized pre- treatment conditions． Protein，fat，and starch in milk powder were dissociated using a variety of composite enzymes protease，lipase and amylase ． The sample was ultrasonically extracted using mixed solution of L- cysteine，hydrochloric acid with methanol and was further purified by RP solid phase column． Mercury speciation was separated by Agilent Eclipse XDB- C18 column 5 μm， 4． 6 mm 150 mm ． The mobile phase contained 10 mmol/L ammonium acetate， 0． 12 L- cysteine， and 5 m m methanol solution． Three kinds of mercury speciation were baseline separated within 5 min． The spiked recoveries of inorganic mercury，methylmercury and ethylmercury were obtained in the range of 79． 9 －111． 2． The instrument detection limits were 0． 5 μg/kg，0． 6 μg/kg and 0． 9 μg/kg，respectively． The results obtained from actual sample testing show that the extraction rate of total mercury can reach more than 70 in lo