固定化微生物对石油污染土壤修复条件优化研究.pdf

2 0 2 1 年第3 期 有色金属 冶炼部分 h t t p ／／y s y l ．b g r i m m ．c n d o i 1 0 ．3 9 6 9 ／j ．i s s n ．1 0 0 7 7 5 4 5 ．2 0 2 1 ．0 3 ．0 0 9 固定化微生物对石油污染土壤 修复条件优化研究 白鹭，吴春英，谷风 吉林化工学院资源与环境学院，吉林吉林1 3 2 0 2 2 摘要探讨固定化微生物降解石油污染土壤最佳理化条件，为修复石油污染土壤提供理论依据。从几种 农业废弃物中选出固定化微生物的最优载体，并以吉林前郭油田原油为降解对象，考察固定化微生物投 入量、原油初始浓度、表面活性剂投加量、孔隙率、含水率、p H 及营养成分含量对原油降解率的影响。秸 秆为固定化微生物最佳载体。取15 0 0g 土样进行单因素试验，投入6 0g 原油，最优化的降解条件是添 加固定化微生物5 0g ／L ，最佳环境因素是孔隙率4 5 ％、含水率2 0 ％、p H 一8 ，营养成分C ／N 一9 。固定化 微生物降解能力远超过游离菌降解石油污染土壤的能力，调节到最佳的土壤环境，投入一定量的固定化 微生物，能够大幅提高石油污染土壤降解率。 关键词固定化微生物；石油污染土壤；生物修复；土壤理化性质 中图分类号X 5 3 ；X 1 7 2文献标志码A文章编号1 0 0 7 7 5 4 5 2 0 2 1 0 3 一0 0 5 卜0 6 S t u d yo no p t i m i z a t i O no fI m m o b i l i z e dM i c r o o r g a n i s mo n R e m e d i a t i o nC o n d i t i o no fP e t r o l e u m c o n t a m i n a t e dS o i l B A IL u ，W UC h u n y i n g ，G UF e n g C 0 1 l e g eo fE n v i r o n m e n t a lE n g i n e er i n g ，J i l i nU n i v e r s i t yo fC h e m i c a lT e c h n o l o g y ，J i l i n1 3 2 0 2 2 ，J j l i n ，C h l n a A b s t r a c t I no r d e rt op r o v i d es u f f i c i e n tb a s i sf o rt r e a t m e n to fp e t r o l e u mc o n t a m i n a t e ds o i l ，t h eo p t i m u m p h y s i c a l a n dc h e m i c a lc o n d i t i o n so fs o i lw e r e e x p l o r e df o rp e t r o l e u mh y d r o c a r b o nd e g r a d a t i o nb y i m m o b i l i z e dm i c r o o r g a n i s m s ．T h eo p t i m a lc a r r i e ri m m o b i l i z e dm i c r o o r g a n i s mw a ss e l e c t e df r o ms e v e r a I a g r i c u l t u r a lw a s t e st od e g r a d ec r u d eo i lo fQ i a n g u oo i lf i e l d ．E f f e c t so fq u a n t i t i e so fi m m o b i l i z e dm i c r o b i a l ， i n i t i a lc o n c e n t r a t i o no fc r u d eo i l ， d o s a g eo fs u r f a c t a n t ， p o r o s i t y ， m o i s t u r ec o n t e n t ， pHv a l u e ， a n d n u t r i e n tc o n t e n to nd e g r a d a t i o nr a t eo fo i lw e r ee x a m i n e d ．T h er e s u l t ss h o wt h a ts t r a wi st h eb e s tc a r r i e ro f i m m o b i l i z e dm i c r o o r g a n i s m ，a n dt h eo p t i m u md e g r a d a t i o nc o n d i t i o n si n c l u d ei m m o b i l i z e dm i c r o o r g a n i s m o f5 0g ／L ，p o r o s i t yo f4 5 ％，m o i s t u r ec o n t e n to f2 0 ％， p Hv a l u eo f8 ，a n dc ／N 一8 ．T h ea b i l i t yo f i m m o b i l i z e dm i c r o o r g a n i s m st od e g r a d ep e t r o l e u m p o U u t e ds o i li sf a rg r e a t e rt h a nt h a to f f r e eb a c t e r i a ， a n dd e g r a d a t i o ne f f i c i e n c yo fp e t r o l e u m p o I l u t e ds o i lc a nb eg r e a t l yi m p r o v e db ya d ju s t i n gt ot h eo p t i m a l s o i le n v i r o n m e n ta n da p p r o p r i a t eu s i n go fs u r f a c t a n t sa n di m m o b i l i z e dm i c r o o r g a n i s m s ． K e yw o r d s i m m o b i l i z e dm i c r o o r g a n i s m s ； p e t r o l e u m c o n t a m i n a t e ds o i l ；b i o r e m e d i a t i o n ；p h y s i c a la n d c h e m i c a lp r o p e r t i e so fs o i l 收稿日期2 0 2 0 一1 1 1 0 基金项目吉林省科技厅项目 2 0 2 0 0 2 0 0 9 J C ；吉林省教育厅项目 J J K H 2 0 2 0 0 2 5 5 K J 作者简介白鹭 1 9 7 卜 ，女，蒙古族，吉林洮南人，硕士，副教授 万方数据 5 2 有色金属 冶炼部分 h t t p ／／y s y l ．b g r i m m ．c n 2 0 2 1 年第3 期 随着当今工业化快速发展，石油污染土壤问题 日益严重，在石油的开采和油品贮存、运输和使用过 程中，发生各种泄露事故，造成了严重的石油污染土 壤。石油进入土壤后对土壤理化性质造成很大影 响[ 1 ] 堵塞土壤孔隙、降低土壤透气和透水性能，使 土壤板结；改变土壤中氮磷含量，导致土壤中有效氮 磷含量大量减少[ 2 ] ，土壤生态环境受到严重破坏。 通过食物链对人类身体也造成很大伤害[ 3 ] ，因此，石 油污染土壤成为当前世界关注的环境问题。微生物 修复石油污染土壤技术具有工艺简单、费用低、效率 高以及无二次污染等明显优势，近年来得到世界专 家学者广泛研究。目前用于污染土壤修复的可降解 菌主要为游离菌，但游离菌降解石油烃的效果较差。 固定化微生物技术[ 4 1 是目前石油污染土壤治理研究 的热点。大部分农业废弃物[ 5 ] 可作为固定化微生物 载体用于油污土壤修复，在石油烃污染物降解后，其 可在土壤中进行生物降解，进一步改善土壤理化性 质及微生物特性，从而对石油污染土壤修复起到很 好效果。不同的土壤环境可以适应不同的微生物， 本文对吉林省前郭油田附近土壤进行研究，采用农 业废弃物作为载体，利用前期试验筛选出的石油高 效降解菌，制备固定化微生物，筛选出高降解率的固 定化微生物，模拟石油污染土壤的修复，考察不同固 定化微生物投放量及土壤中石油不同初始浓度降解 率最高的条件，以及探讨秸秆固定化微生物降解石 油烃的最佳土壤理化条件[ 4 ] ，为治理石油污染土壤 提供基础数据。 1材料与方法 1 ．1 试验材料、仪器及试剂 1 ．1 ．1 试验材料 油样前郭炼油厂原油。 土壤取自吉林前郭采油机周围。土壤去除植 物残体以及砾石，经碎散、除杂、过筛 1m m 、混匀， 自然风干7d 后密封储存在塑料袋中备用。 菌种所用菌种是试验筛选出来的高效石油降 解混合菌。 载体吉林市郊区收集到的玉米秸秆；吉林市某 木材加工厂收集的锯末；山林里收集的松针；粮油加 工厂收集的稻壳；生物质炭系稻草秸秆置于马弗炉 中3 5 0 ℃裂解5h 生成。所有材料都经干燥、粉碎、 过6 0 目筛，分别装瓶备用。 1 ．1 ．2 试剂与仪器 试验仪器实验室圆盘粉碎机；L D Z X 型立式自 动电热压力蒸汽灭菌锅；S P X - 3 0 0 智能生化培养箱； H Z S H 超级水浴恒温振荡器；7 5 5 B 紫外可见分光 光度计；2 1 6 P K 离心机；P H s - 3 C T 酸度计。 试验药品蛋白胨、牛肉膏；N a C l 、N H 。C l 、 K H 2 P 0 4 、M g S O 。、F e 2 S 0 4 、K 2H P 0 4 、K C l 、C a C l 2 、 N a O H ，均为分析纯试剂；石油、氮肥 碳酸氢铵，含 氮量约1 7 ％ 、磷肥 过磷酸钙，含磷量约1 6 ％ 。 1 ．2 试验方法 1 ．2 ．1 固定化微生物制备 取以上5 种已灭菌载体各1 0 0g ，分别加入固定 化培养基中，取选出来的石油降解菌液5 0m L 倒入 固定体培养基中振荡，2 8 ℃、2 0 0r ／m i n 固定2 4h ， 倒掉上层液，用8 5 ％无菌生理盐水将载体材料转移 到离心管中，10 0 0r ／m i n 离心5m i n ，弃清液。重复 2 次，离心得到的沉淀用8 5 ％无菌生理盐水洗涤2 次，即为固定化微生物。 1 ．2 ．2 优化土壤理化性质试验 土壤中的营养成分、含水率、孔隙率、p H 和石 油污染程度是微生物生长繁殖的重要因素[ 6 ] 。在生 物修复过程中，补充适量的氮磷、水分和表面活性 剂，提高原油的疏水性等措施，来促进微生物的生长 繁殖，从而提高微生物的降解率。考虑到原位修复 时的可调控因素，选择高效固定化微生物，改变固定 化微生物的投放量、表面活性剂用量，选择土壤理化 性质的最佳条件等，进行试验，最后选取最佳条件。 采用花盆模拟试验，将采集备用的土样用相同 花盆分装，装样量每盆15 0 0g ，原油含量6 0g ，将盆 装土壤在恒温箱内2 8 ℃培养2 0d ，每两天喷水补 湿，搅拌一次，补水量相同。分别测试不同时间土壤 内原油去除率。 1 ．2 ．3 土壤理化性分析方法 采用重量法测定含水率；采用容重密度测定孔 隙率；采用酸度计电位法测定土样p H ，半微量凯氏 法测定土样的总氮含量；钼锑抗比色法测定土壤中 可溶性磷口] 。 1 ．2 ．4 石油降解率测定 用脂肪提取器来提取土壤石油类物质，采用紫 外分光光度法测定土壤中石油类物质，测出相应的 吸光度，计算土壤中石油烃的含量，然后根据降解前 后土样中石油含量计算石油类物质的降解率叼。 2结果与分析 2 ．1 固化微生物筛选及降解石油烃效率 分别取玉米秸秆、木屑、松针、花生壳、生物质炭 万方数据 2 0 2 1 年第3 期 有色金属 冶炼部分 h t t p ／／y s y l ．b g r i m m ．c n 5 3 作为固化菌载体，采用吸附法制备吸附时间为1 0h 的固定化微生物，通过几种材料作为载体进行原油 降解试验，确定降解性能最优载体，结果见图1 。由 图1 可以看出，在前1 2d ，固化微生物与游离微生物 修复效果相差不大，这是因为微生物在初期主要是 在合成自身物质，处于生长阶段，1 2d 后，固化微生 物的添加显著提高了石油降解率。经过3 0d 降解， 固化微生物土壤样品石油烃的降解率比游离微生物 至少提高了2 5 个百分点。固定化微生物投入石油污 染土壤后[ 8 ] ，可以增加土壤有机物含量、改善石油污 染土壤的理化性质，从而改善石油污染土壤环境和优 势菌群，还能增加微生物数量。因此，固化微生物的 石油烃降解能力普遍高于游离微生物，秸秆固定化微 生物降解率高于游离微生物4 0 个百分点以上。 比较几种固化材料石油烃降解率数据可知，松 针、木屑、花生壳、秸秆载体对石油烃降解率逐步增 高，秸秆接近8 0 ％。生物炭载体在1 6d 前的降解率 最高，这是由于生物炭的比表面积比秸秆大，吸附菌 量高，因此降解率也高，而1 6d 后略低于秸秆载体， 这是因为秸秆材料分解产物还可以为石油降解微生 物提供石油烃类物质的共代谢底物，使微生物量增 加[ 9 ] ，而生物炭只能起到载体的作用，真正起到修复 作用的是微生物，所以秸秆固化微生物降解石油烃 高于生物炭载体。因此，本试验的最佳固化微生物 材料是秸秆，后续试验中所采用的是以秸秆为载体 的固化微生物。 05l O1 52 02 53 03 5 T i m 洲 图1不同材料作为载体的石油烃降解率 F i g ．1 E f f e c t so fd i f f e r e n ti m m o b i l i z e dm a t e r i a l s O nd e g r a d a t i o nr a t e0 fp e t r O l e u mh y d r O c a r b O n 2 ．2 固定化微生物投加量对石油烃降解率影响 在土壤样本中分别投加质量分数1 ％、3 ％、 5 ％、7 ％的固化微生物，随着时间的变化，石油烃降 解率如图2 所示。从图2 可知，随着降解时间的延 长，固化微生物降解石油烃的降解率不断增加，直至 2 1d 后基本稳定。前7d ，所有石油烃的降解率都 比较小，这是由于固化微生物投入土壤后处于对土 壤环境适应阶段，尚未发挥其有效降解作用。从7d 开始，石油烃降解速率加快，微生物在适应新环境之 后开始快速生长繁殖，使石油烃的降解率快速提高。 在2 1d 时，含量1 ％、3 ％、5 ％、7 ％的固化微生物对 4 ．8 2 ％ 质量分数 油污土壤的降解率分别达到 4 2 ．1 3 ％、4 7 ．1 9 ％、6 2 ．1 1 ％和6 4 ．5 2 ％。另外，5 ％ 和7 ％固化微生物对石油烃降解率的差异不显著， 5 ％固化微生物的降解率略高，这可能是因为土壤自 身环境条件限制了微生物的能力，当添加过多的微 生物时，微生物的自身代谢产物限制了微生物的存 活率，导致7 ％固化微生物的降解率降低。因此， 5 ％浓度的固化微生物对含4 ．8 2 ％石油烃浓度的土 壤降解最佳。 图2 添加不同浓度固化微生物的石油烃降解率 F i g ．2 E f f e c t so fi m m o b i l i z e dm i c r o o r g a n i s m sw i t h d i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n sO nd e g r a d a t i o nr a t e O fp e t r o l e u mh y d m c a r b O n s 2 ．3 土壤中石油烃初始浓度的影响 取15 0 0g 土壤样品，投入5 ％ 质量比 的固化 微生物，分别在石油烃初始浓度为1 0 、2 0 、3 0 、4 0 、 5 0 、6 0 、7 0g ／k g 条件下培养3 5d ，考察石油烃初始浓 度对降解效果的影响，结果见图3 。图3 可知，当原 油浓度低于4 0g ／k g 时，固定化微生物对石油烃有 较好的降解效果，降解率均在7 0 ％以上；当石油烃 浓度高于4 0g ／k g 时，土壤表面石油烃覆盖面积增 大，影响氧气的传递，使固定化微生物因缺氧而无法 生长繁殖，并且石油烃浓度过高会对固化微生物产 生毒害作用，导致营养匮乏，不能满足微生物降解石 万方数据 5 4 有色金属 冶炼部分 h t t p ／／y s y l ．b g r i m m ．c n 2 0 2 1 年第3 期 油烃的需要，使得石油烃降解率大幅降低。因此，固 化微生物的适宜石油烃浓度不高于4 0g ／k g 。 l O2 03 04 05 06 07 0 I l I i “a lc o ∞曲t m 6 0 n0 fp e 叫e u 删k ‘k g - 1 图3 石油烃初始浓度对降解率的影响 F i g ．3 E f f 奄c t so fi n i t i a lc o n c e n t r a t i 蚰o f p e t m l e u mh y d r o c a r b 蚰蚰d e g 仡d a t i o nr a t 船 2 ．4 土壤环境理化条件对降解效率的影响 2 ．4 ．1 土壤孔隙率 研究表明，提高土壤的孔隙率可以发挥土壤的 通气性、供水量和保水作用，使微生物在良好环境下 生长繁殖，提高微生物降解能力。将土壤样品中加 入一定量膨松剂 农业秸秆等粉碎制得 ，搅拌均匀， 调整土壤的孔隙率分别为3 0 ％、3 5 ％、4 0 ％、4 5 ％、 5 0 ％、5 5 ％、6 0 ％，接种质量分数为5 ％的固定化微 生物，隔天翻土，3 0d 取土样测定土壤中石油烃的 降解率，结果如图4 所示。 P o l ∞i t v ，％ 图4 不同孔隙率对石油烃降解率的影响 F i 昏4 E f f e c t so fd i f f e r e n tp o r o s i t y 蚰 d e g m d a t i o n 陷t eo fp e t r o I e u mh y d r o c a r b o n 由图4 可以看出，当土壤的孔隙度为原始值 3 0 ％，即不添加膨松剂‘1 0 3 时，土壤中的石油烃降解 率只有1 5 ．5 ％，而随着孔隙率的增大，在孔隙率达 到4 5 ％时，石油烃降解率达到4 2 ．3 ％，在孔隙率小 于4 5 ％阶段，随着孔隙率的增大，石油烃降解率也在 增加；在孔隙率大于4 5 ％，土壤的持水率变差，一方面 补水的频率增加，另一方面影响氧气扩散，缺氧而导 致固定化微生物活性降低，降解率下降。总体来看， 孑L 隙率为4 5 ％的石油污染土壤为最佳环境条件。 2 ．4 ．2 土壤含水率 土壤含水率对土壤微生物有很大影响，直接影 响石油降解菌生长繁殖。水不仅影响石油污染土壤 微生物多样性，也是制约石油污染土壤微生物多态 性的因素[ 1 1 。1 2 ] 。 将烘干的土样按质量比加入一定量的水，使土壤 含水率分别为1 0 ％、1 5 ％、2 0 ％、2 5 ％、3 0 ％、4 0 ％，土 样中加入一定量膨松剂混合，调整土壤的孔隙度为 4 5 ％，接种质量分数为5 ％的固定化微生物，定期补 水，保持含水率，隔天翻土，保证土壤的孔隙度，同时 取样测定土壤中的石油烃降解率，结果如图5 所示。 由图5 可知，当土壤含水率为1 0 ％时，石油污染土 壤修复3 5d ，石油烃降解率接近1 0 ％，说明在土壤 干燥的情况下，微生物处在缺水环境，微生物细胞缺 少外部营养物质供应，活性受到抑制，代谢放缓，微 生物处于不活动、繁殖少状态，石油烃降解率很低。 随着含水率的增高，微生物降解石油烃的速率逐渐 增加，当含水率达到2 0 ％时，修复3 5d ，石油烃降解 率为4 3 ．1 ％，这时土壤颗粒周围水分充足，细菌活 动，离开土壤颗粒进入水中，增加了微生物与石油的 接触机率，微生物开始分裂繁殖，此时微生物最活跃。 继续增加水量，超过2 0 ％时，固定化微生物降解率逐 渐下降，这是由于土壤水分过高，影响土壤透气性，妨 碍氧的供应，微生物活动减弱，导致石油烃降解率下 降。因此，土壤含水率2 0 ％为最佳修复条件。 2 ．4 ．3土壤p H p H 是影响土著微生物生长及活性的重要环境 因子。选取初始p H 分别为5 ．5 、6 、6 ．5 、7 、7 ．5 、8 、 8 ．5 、9 、1 0 的石油污染土壤，石油浓度为5 ％，温度 2 5 ℃条件下培养3 5d ，测定固定化微生物对石油烃 的降解效果，结果如图6 所示。由图6 可知，石油污 染土壤在碱性条件下对石油烃降解能力强于酸性条 件，这与吉林前郭油田土壤偏碱性有关。p H 一8 附 近降解率最大，为4 8 ．9 ％。这是因为，p H 过低或过 高，环境酸碱性都超出了微生物酶的生长适应范围； 对微生物的生长和酶的分泌都会产生不利影响，影 响微生物的生长繁殖和酶的活性。因此，固定化微 生物生长的最佳p H 是7 ．5 ～8 ．5 。 万方数据 2 0 2 1 年第3 期有色金属 冶炼部分 h t t p ／／y s y l ．b g r i m m ．c n 5 5 图5 石油污染土壤中不同含水率 对石油烃降解率的影响 F 逅．5 E f f e c t so fd i f f e r e n tm o i s t u r ec o n t e n to n d e g r a d a t i o nr a t eo fp e t r o l e u mh y d r o c a r b o n 图6 石油污染土壤降解率随p H 的变化 F i g ．6C h a n g eo fp e t r o l e u mh y d r O c a r b O n w i t hp HV a l u e 2 ．4 ．4 土壤营养物质 在石油污染的土样中添加氮、磷肥，使土壤中总 磷含量为1 5 0m g ／k g ，调节氮源使氮磷比 N ／P 分别 为6 、8 、9 、1 0 、1 2 ，孑L 隙率为4 5 ％，含水率为2 0 ％，p H 为8 ，每隔五天补充氮磷达到以上比例，石油烃的 降解效率如图7 所示。由图7 可知，经过3 5d 的 生物修复，N ／P 一9 的土壤石油降解率最大，达到 7 6 ．5 8 ％，N ／P 过高和过低，都不利于土壤中石油 烃的降解，N ／P 过低，营养物质不能满足微生物生 长繁殖需要，限制微生物的生长繁殖，过高的N ／P 会导致养分过剩，对微生物有毒害作用，抑制微生 物的活性。合理地供给N 、P ，能使微生物处于最 活跃期，利于微生物的生长繁殖。因此，最佳N ／P 为9 。 051 01 52 02 53 03 54 0 T i m 洲 图7 石油烃降解率随营养物质比例的变化 F i g ．7 E f f e c t so fNa n dPc o n t e n t si n s o i lo n d e g r a d a t i o nr a t eO fp e t r o l e u mh y d r o c a r b o n 2 ．5 土壤环境的最优条件确定 取土样15 0 0g 均分成三盆，调节土壤中石油 含量为4 ．8 ％，土壤的p H 为8 ，每天搅拌1 次，保证 孔隙率在4 5 ％，每2 天喷水，保证含水率在4 5 ％， c ／N 营养成分每五天进行监测，调节营养在N ／P 一9 左右，然后投人秸秆为载体的固定化微生物，投入量 分别为6 0 、7 5 、9 0g 质量分数分别是4 ％、5 ％、 6 ％ ，2 8 ℃培养3 5d ，在其他环境条件都在试验得 到最佳情况下，测出不同固定化微生物对石油污染 土壤的降解率，结果见图8 。从图8 可见，在固定化 微生物的三种投加量中，6 0g 固定化微生物的降解 率最低，是因为微生物含量少，而9 0g 投加量初始 阶段降解率最高，原因是初始阶段营养物质还够微 生物的营养，随着时间的延长，营养物质逐渐减少， 而微生物量不断增多，导致2 1d 开始，石油降解率 增长很少，这是由于微生物代谢产物对微生物有毒 害作用，使微生物活性下降而导致去除率降低，7 5g 质 量分数5 ％ 固定化微生物投加量是三种投加量中 石油去除效率最高者，达到8 6 ．4 5 ％，因此，固定化 微生物最佳投加量与前面试验相符，所以上述试验 条件为最佳试验条件。 万方数据 5 6 有色金属 冶炼部分 h t t p ／／y s y l ．b g r i mm - c n 2 0 2 1 年第3 期 图8 最佳环境条件固定化微生物去除率 F i g ．8 I m m o b i l i z em i c r o b i a lr e m o v a lr a t e s i no p t i m u me n V i r o n m e n t a lc o n d i t i o n s 3结论 1 在同等条件下，最佳的固定化载体是玉米秸 秆，其对石油烃降解率最高，修复效果最好。 2 在同等条件下，土壤中投加5 ％ 质量百分 比 的固定化微生物，降解效果最好的石油污染土壤 中的石油烃浓度最高不高于4 0g ／k g 。 3 修复石油污染土壤最佳的理化条件是温度 2 5 ℃、含水率2 0 ％、孑L 隙率4 5 ％、p H 一8 ，营养成分 N ／P 一9 。 4 在掌握石油污染土壤的背景条件下，通过调 节土壤理化条件，投加表面活性剂，能够提高修复土 壤的有效途径。 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] 参考文献 李政，顾贵洲，宁春莹，等．固体微生物菌剂在克拉玛依 石油污染土壤生物修复中的应用[ J ] ．石油学报 石油 加工 ，2 0 1 6 ，3 2 6 1 1 9 5 1 2 0 4 ． L IZ ，G UGZ ，N I N GCY ，e ta 1 ．A p p l i c a t i o no fs o l i d m i c r o b i a l a g e n t i nb i o r e m e d i a t i o no f p e t r 0 1 e u m c o n t a m i n a t e ds o i li nK a r a m a yo i l f i e l d [ J ] ．A c t aP e t r o l e i S i n i c a P e t r o l e u mP r o c e s s i n gS e c t i o n ，2 0 1 6 ，3 2 6 1 1 9 5 1 2 0 4 ． 孙铁珩，周启星，李培军．污染生态学[ M ] ．北京科学 出版社，2 0 0 1 ． S U NTH ，Z H o UQX ，L IPJ ．P o l l u t i o nE c o l o g y [ M ] ． B e 巧i n g S c i e n c eP r e s s ，2 0 0 1 ． W H A N GLM ，L I UPWG ，M ACC ，e ta 1 ． A p p “c a t i o n o f b i o s u r f a c t a n t s ， r h a m n o l i p i d ， a n d s u r f a c t i n ， f o re n h a n c e d b i o d e g r a d a t i o n o fd i e s e l 一 c o n t a m i n a t e dw a t e ra n ds o 订[ J ] ．J o u r n a lo fH a z a r d o u s M a t e “a l s ，2 0 0 8 ，1 5 1 1 1 5 5 1 6 3 [ 4 ]张秀霞，张守娟，张涵，等．固定化微生物对石油污染土 壤理化性质的调控作用[ J ] ．石油学报 石油加工 ， 2 0 1 4 ，3 0 6 1 1 0 6 1 1 1 2 ． Z H A N GXX ，Z H A N GSJ ，Z H A N GH ，e ta 1 ．C o n t r o l e f f e c to fi m m o b i l i z e dm i c r o o r g a n i s m so np h y s i c a la n d c h e m j c a lp r o p e r t i e so fp e t r o l e u m c o n t a m i n a t e ds o i l [ J ] ． A c t aP e t r o l e iS i n i c a P e t r o l e u mP r o c e s s i n gS e c t i o n ， 2 0 1 4 ，3 0 6 1 1 0 6 1 1 1 2 ． [ 5 ] L I A N GYT ，x uz ，D A IDJ ，e ta 1 ．P o r o u sb i o c a r r i e r - e n h a n c e db i o d e g r a d a t i o no fc r u d eo i lc o n t a m i n a t e ds o i l [ J ] ． I n t e r n a t i o n a lB i o d e t e r i o r a t i o n B i o d e g r a d a t i o n ，2 0 0 9 ， 6 3 1 8 0 一8 7 ． [ 6 ] 李政，梁昌峰，赵朝成，等．应用S P S S 软件分析石油污 染土壤微生态环境[ J ] ．石油学报 石油加工 ，2 0 1 2 ， 2 8 2 3 4 5 3 5 1 ． L IZ ，L I A N G CF ，Z H A 0CC ，e ta 1 ．A n a l y s i so f 1 1 1 i c r o b i a le c o s y s t e mi np e t r 0 1 e u mp 0 1 l u t e ds o i l sb ys t a t i s t i c a m l y s i ss o f t w a r es P S S 口] ．A c t aP e t m l e is i n i c a P e t r o l e u m P r o c e s s i n gs e c t i o n ，2 0 1 2 ，2 8 2 3 4 5 3 5 1 ． [ 7 ] 鲁如坤．土壤农业化学分析方法[ M ] ．南京中国农业 科技出版社，1 9 9 9 1 3 1 6 5 ． L URK ．M e t h o d so fA g r i c u l t u r a lc h e r I l i c a lA n a l y s i s [ M ] ． N a n j i n g C h i n aA g r i c u l t u r eS c i e n c ea n dT e c h n i q u eP r e s s ， 1 9 9 9 1 3 1 6 5 ． [ 8 ] 张涵，张秀霞，尚琼琼，等．秸秆载体腐解对微生物修复 石油污染的影响[ J ] ．石油学报 石油加工 ，2 0 1 6 ， 3 2 4 7 6 7 7 7 2 ． Z H A N GH ，Z H A N GXX ，S H A N GQQ ，e ta 1 ．E f f e c t o fs t r a wc a r r i e r d e c o m p o s i t i o n o nr e m e d i a t i o no f p e t r o l e u mc o n t a m i n a t e ds o i lb ym i c r o o r g a n i s m [ J ] ． A c t aP e t r 0 1 e iS i n i c a P e t r o l e u mP r o c e s s i n gS e c t i o n ， 2 0 1 6 ，3 2 4 7 6 7 7 7 2 ． [ 9 ] 张四海，曹志平，胡蝉娟．添加秸秆碳源对土壤微生物 生物量和原生动物丰富度的影响[ J ] ．中国生态农业学 报，2 0 1 1 ，1 9 6 1 2 8 3 1 2 8 8 ． Z H A N GSH ，C A OZP ，H UCJ ．E f f e c to fa d d e ds t r a w c a r b o no ns o i lm i c r o b ea n dp r o t o z o aa b u n d a n c e [ J ] ． C h i n e s eJ o u r n a lo fE c o r A g r i c u l t u r e ，2 0 1 1 ，1 9 6 1 2 8 3 1 2 8 8 ． [ 1 0 ] 李政．耐热石油降解混合菌群降解特性及多环芳烃共代 谢作用的研究[ D j ．山东青岛中国石油大学 华东 ，2 0 1 2 ． L IZ ．S t u d yo nd e g r a d a t i o nc h a r a c t e r i s t i c so ft h e m o p h 订i c m i c r o b i a lc o n s o r t i u ma n dc o m e t a b 0 1 i s mo fp o l y c y c l i c a r o m a t i ch y d r o c a r b o n s [ D ] ．Q i n g d a o C h i n aU n i v e r s i t y o fP e t r o l e u m E a s tC h i n a ，2 0 1 2 ． 下转第6 4 页 万方数据 6 4 有色金属 冶炼部分 h t t p ；／／y s y l ．b g r i m m ．c n 2 0 2 1 年第3 期 上接第5 6 页 [ 1 1 ] 贾建丽，李广贺，张旭，等．基于P C R D G G E 技术的石[ 1 2 ] 油污染土壤微生物多态性[ J ] ．清华大学学报 自然科 学版 ，2 0 0 5 ，4 5 9 1 2 1 7 1 2 2 0 ． 儿AJL ，L IGH ，Z H A N GX ，e ta 1 ．M i c r o b i a l c o m m u m t i e si np e