苯并a 芘的测定 乙酰化滤纸层析荧光光度法.PDF

1 FHZHJSZ0041 水质 苯并a芘的测定 乙酰化滤纸层析荧光光度法 F-HZ-HJ-SZ-0041 水质苯并a芘的测定乙酰化滤纸层析荧光光度法 1 范围 本方法测定水质中苯并a芘以下简称 BaP 本方法适用于饮用水 地面水 生活污水 工业污水 工业废水 最低检出浓度为 0.004g/L 注意BaP 是一种由五个环构成的多环芳轻它是多环芳烃类的强致癌代表物基 于 BaP 的强致癌性按本方法分析时必须戴抗有机溶剂的手套操作应在白搪瓷盘中进 行如溶液转移定容点样等室内应避免阳光直接照射通风良好 2 原理 水中多环芳烃及环已烷可溶物经环已烷萃取水样必须充分摇匀萃取液用无水硫酸钠 脱水浓缩而后经乙酰化滤纸分离分离后的 BaP 用荧光分光光度计测定 3 试剂 除另有说明外分析时均使用分析纯试剂和蒸馏水 3.1 BaP 标准溶液的配制称取 5.0mg固体标准 BaP 于 50mL 容量瓶中因 Ba P 是强致癌物为了减少污染以少转移为好用少量苯溶解后加环已烷至标线其浓度 为 100g/mL将此贮备液用环己烷稀释成 10g/mL 的标准使用液避光贮于冰箱中 3.2 乙酰化滤纸的制备把 1530cm 的层析滤纸 15 至 20 张卷成高 15cm 的圆筒状逐张 放入 1000mL 高型烧杯中杯壁与靠杯的第一张纸间插一根玻璃棒杯中间放一枚玻璃熔封 的电磁搅拌铁芯在通风柜中沿杯避慢慢倒入乙酰化剂由苯乙酸酐浓硫酸750mL250 mL0.5mL 混合配制成磁力恒温搅拌器的温度保持 551连续反应 6h取出乙酰化滤 纸用自来水漂洗 34 次再用蒸馏水漂洗 23 次晾干次日用无水乙醇浸泡 4h后取出 乙酰化滤纸晾干压平备用 3.3 环已烷重蒸用荧光分光光度计检查在荧光激发波长 367nm狭缝 10nm荧光发 射狭缝 2nm波长 405nm 应先无峰出现 3.4 丙酮重蒸 3.5 甲醇 3.6 乙醇 3.7 苯重蒸 3.8 乙酸酐 3.9 硫酸1.84g/mL 3.10 无水硫酸钠 3.11 二甲基亚砜DMSO用前先用环已烷萃取两次500mL 二甲基亚砜加 50mL 环已烷 萃取弃去环而烷后备用 4 仪器 常用实验室设备和下列仪器 4.1 备有紫外激发和荧光分光的荧光分光光度计光程为 10mm的石英比色皿 4.2 紫外分析仪带 365nm 或 254nm 的滤光片 4.3 康氏振荡器 4.4 磁力恒温搅拌器 4.5 立式离心机转速为 4000r/min 4.6 分液漏斗1L3L100mL活塞上禁用油性润滑剂活塞直接用水或有机溶剂润滑即 可 4.7 锥形瓶250mL具磨口玻璃塞 2 4.8 恒温水浴锅 4.9 层析缸 4.10 具磨口塞刻度离心管5mL 4.11 点样用玻璃毛细管自制 4.12 分析天平感量 0.01mg 5 样品保存 水样应贮于玻璃瓶中并避光当日24h内用环已烷萃取环已烷萃取液放入冰箱中保 存 6 操作步骤 6.1 样品和标样的预处理 6.1.1 清洁水和地面水萃取 取充分混合的清洁水样 2000mL 放入 3000mL 分液漏斗中用环已烷萃取两次每次用 50mL在康氏振荡器上每次振荡 3min取下放气静置半小时待分层后将两次环已烷 萃取液收集于具塞锥形瓶中弃去水相部分 6.1.2 工业废水的萃取 取混匀的工业废水样 1000mL 放入 1000mL 分液漏斗中 每次用 50mL 环已烷萃取两次 在康氏振荡器上每次振荡 3min取下放气静置半小时待分层后将两次环已烷萃取液收 集于具塞锥形瓶中弃去水相部分 6.1.3 脱水浓缩 在上述环已烷萃取液中加入无水硫酸钠约 2050g静置至完全脱水约 12h 至具塞锥形瓶底部无水为止如果环已烷萃取液颜色比较深则将脱水后环已烷定容至 100mL分取其一定体积浓缩如果颜色不深则全部浓缩在温度为 7075用 KD 浓缩器减 压浓缩至近干用苯洗涤浓缩管壁三次每次用 3 滴再浓缩至 0.05mL以备纸层析用 6.1.4 纸层析分离 在乙酰化滤纸 30cm长的下端 3cm处 用铅笔画一横线 横线两端各留出 1.5cm 以 2.4 cm 的间隔将标准 BaP 与样品浓缩液用玻璃毛细管交叉点样点样斑点直径不超过 34 mm 点样过程中用冷风吹干每支浓缩管洗两次每次用一滴苯全部点在纸上将点过样的层 析滤纸挂在层析缸内架子上加入展开剂 [甲醇乙醚蒸馏水441体积比]直 到滤纸下端浸入展开剂 1cm为止加盖用透明胶纸密封于暗室中展开 24h取出层析滤 纸在紫外分析仪照射下用铅笔圈出标样 BaP 斑点以及样品中与其高度Rf值相同的 紫蓝色斑点范围 剪下用铅笔圈出的斑点剪成小条分别放入 5mL 具塞离心管中在 105110烘箱中 烘 10min亦可在干燥器中或干净空气中晾干在干燥内冷却后加入丙酮至标线用手振 荡 1min后以 300r/min速度离心 2min上清液留待测量用 6.2 测定 将标准 BaP 斑点和样品斑点的丙酮洗脱液分别注入10mm的石英比色皿中在激发 发射狭缝分别为 10nm2nm激发波长为 367nm 处测其发射波长 402nm405nm408 nm 处的荧光强度 F 7 结果计算 用窄基线法按下列公式计算出标准 BaP 和样品 BaP 的相对荧光强度再计算出 BaP 的含量 C用相对比较计算法 2 408402 405 nmnm nm FF FF −相对荧光强度 3 式中C水样 BaP 含量g/L M标准 BaP 点样量g F标准标准 BaP 的相对荧光强度 F样品样品斑点的相对荧光强度 V水样体积L R环已烷提取液总体积与浓缩时所取的环已烷提取液的体积之比值 8 精密度与准确度 8.1 精密度 五个实验室自行配制的含有 BaP 近似 0.2gL 的焦化废水的精密度见表 1 表 1 精密度 实验室编号 平均值 变动系数 1 0.230 6.9 2 0.199 8.0 3 0.213 13.0 4 0.202. 6.6 5 0.179 4.2 8.2 准确度 两种工业废水的加标回收率见 2表 3 表 2 焦化废水加标回收结果 实验室编号 加标回收率平均值 变动系数 1 107.0 6.9 2 93.3 8.0 3 121.0 13.0 4 99.0 6.6 5 73.3 4.2 表 3 沥青废水加标回收结果 实验室编号 加标回收率平均值 变动系数 1 79.8 4.4 2 83.0 12 3 81.4 7.6 4 93.3 6.2 9 参考文献 GB 11895-1989 附录 A 对除去 B a P 干扰物的说明 补充件 A1 石油含油废水按下面操作进行 将上述 6.1.2 100mL 环已烷萃取液定容后取出 20mL 放入 100mL 分液漏斗用 DMSO 萃取 2 次每次 5mL用手振荡 2min注意放气静置半小时待分层后收集两次萃取的 DMSO 液于另一个 100mL 分液漏斗中弃去环已烷液于另一个 10mL DMSO 液的分液漏斗 R VF FM C 标准 样品 4 中 加入事先用冰冷却过的 1 1HCl 15mL 冷却至室温 再用环已烷反萃取 2 次 每次 5 mL 用手振荡 2min注意放气合并两次环已烷萃取液 10mL 于另一个 100mL 分液漏斗中加入 5mL15NaOH 溶液洗一次 振荡两分钟 弃 NaOH 液层 再用蒸馏水先洗 23 次 每次 15mL 直至洗涤后的蒸馏水 pH7弃去水相将环已烷萃取液加无水硫酸钠脱水后在 KD 浓缩器 上浓缩以下步骤包括乙酰化滤纸层析分离荧光分光光度计测量计算与7相同 A2 测量后的 B aP 丙酮洗脱液切勿随意丢弃可放入通风柜中专用大烧杯中统一处理 A3 本实验均应在避免阳光直接照射下进行 A4 所用玻璃器皿必须用洗液浸泡 4h以后洗涤