燃煤型砷中毒患者外周血红细胞GPA突变频率研究.pdf

遵义医学院 硕士学位论文 燃煤型砷中毒患者外周血红细胞GPA突变频率研究 姓名徐海环 申请学位级别硕士 专业皮肤病与性病学 指导教师张信江 2003.5.16 毕业论文 燃j l l 型砷中毒患者外周血红细胞血型糖蛋白A 突变频率的研究 燃煤羹砷中毒患者外周血红细胞G P A 突变频率研究 摘要 目的1 、检测燃煤型砷中毒 C A P 患者外周血红细胞血型糖委白A G P A 的突变频率 M F ；2 、C A P 患者与对照鳃G P A - M F 是否有差异； 3 、不同痣程C A P 患考G P A ．M F 是否有差是；4 、C A P 鼬瘿患者与非黔瘤 患者G P A 。M F 是否有差异。 方法分离、霆定4 0 壤C A P 患者外题盘红绍慰，与荧光索标记戆单撬骛 合后，采用流式细胞术进行G P A 。M F 分析。 绪聚i 、4 0 镄C A P 惠者羚撬盘红细戆G P A ．M F N N ，M F 为 2 1 ．2 3 士1 3 ．9 7 1 0 4 ；N P M F为 3 3 ．1 3 士2 5 ．7 2 1 0 。； M M M F 为 11 0 ．9 0 4 - 6 3 ．5 8 1 0 4 ；M 肇M F7 “ 7 2 0 ，3 5 士2 1 ．2 6 x 1 0 4 ；2 、C A P 患者G P A M F 明强高于对照组 P 2 0 年 1 4 例 麓瘙臻 6 爨 菲肿瘸鲤 3 4 捌 1 ．3 主要试裁 M N 分越斑清 上海擞液中心血型参比实验室 M 单抗6 A 7 ．P E 英国国际血型参比实验室 N 单抗B R I C l 5 7 ．F I T C 荚匿餮器纛燕参跑实验黛D r ．R o s e y 馕燃 叠氮钠 N a N 3 S i g m a 公司 十二烷基硫酸钠 S D S S i g m a 公司 醭铯秀嚏 P I S i g m a 公霉 N o n i d e t P - 4 0 N P - 4 0 S i g m a 公制 毕业论文燃煤型砷中毒患者外周m 红细胞叭 l 糖蛋白A 突变频率的研究6 枣牛盘’溪巍蛋是 B S A ≤华美生耱五程公司 其余试剂均为国产分析纯 l 。4 主要溶液嚣裁 磷酸盐缓冲液 P B S 1 7 1 A 液O ．2 m o l ／L N a H 2 P 0 4 2 H 2 015 ．6 9 加入超纯水至5 0 0 r n l B 滚0 ．2 m o l f L N a 2 H P 0 4 2 H 2 07 1 ．6 9 热入邃缝拳至1 0 0 0 m l P B S A 液6 6 ．0 m l 、B 液1 3 4 ．0 m l 、N a C l3 4 ．0 9 加入超纯水至4 0 0 0 m l N a O H 调P B S 液为p H 7 ．2 洗涤液‘6 毛 P B S5 0 0 m l B S A 0 ．5 9 I m g ／m 1 S D S 2 5 m g 5 0 t _ | g ／m 1 染色缓冲液同 S B P B S2 0 0 m l B S A l O g 5 m g ／m 1 N P ．4 00 ．2 m l 0 ．0 1 ％ N a N 3 2 0 0 r a g 1 0 0 肛g ／m 1 鋈定渡哆 P B S9 7 0 m l 3 7 ％甲醛 3 0 m l S D S 1 0 m g t 0 瑟g ／m l 碘化丙啶液 P I 1 6 】 S B1 0 0 n i l P I l i n g 1 0 1 ．t g ／m 1 往以上备溶液均需过2 2 1 , t i n 的徽孔滤麟 毕业论文燃煤趟砷中毒忠赣褂髑衄红卸} 腿血型糖虽自A 突变频率的研究 滤膜需纯水擞沸后7 0 。C 水浴中过夜 1 ．5 主要仪器及设备 流式细胞仪 荧国B e c t o n D i c k i n s o n 公司，翌号F A C S C A L t B U R 离心机①小型高速离心规 德国E p p e n d o r f 公司，型号A G 2 2 3 3 1 ⑦低速自动平衡离心机 北京隧用离心机，型号L D Z 5 2 p H 诗 M e t t l e rT o l e d oD e l t a3 2 0 蝉M e t e r 恒温水浴摇床 G r a n t 公司，魁号O L S 2 0 0 S K - 1 姨速漩潢混匀器 j 王苏鬣牮仪器厂 电子天平 北京S a r t o r i u s 公司 誓逶避募籍 G A L L E N K A M P 烤箱 E C O C E L L 2 ．实验方法 2 ，l 血清分型 参照分墅血清试荆说明 1 、取榉嚣取C A P 患考外周抗凝金血1 5 0 1 a l ； 2 、加入3 m l 出理盐水，洗涤3 次 1 0 0 0 r ／r a i n ，6 m i n ，弃上清； 3 、取3 0 9 I 洗涤蘑的红鲤照如入9 7 0 1 s l 生理盐本粼戏3 ％戆红细戆悬菠 混匀； 4 、取2 支1 ．5 m l 憋E p p e n d o r f 4 寥，每管如入3 0 汪戆3 ％盔绍憨悬滚， 一管加入抗N 血清，另一管加入抗M 血清； 5 、室滠放置I m i n ； 6 、离心 1 5 0 0 r ／r a i n ，1 5 s ； 7 、轻轻振荡，取l 滴上清液，镜下观察、分裂，见袭1 ； 毕业论文燃煤型砷中毒忠者外周血红细胞血型糖蛋白A 突变频率的删f 究8 表1M M 、N N 、M N 血清分型 标准血清 受检者血型 抗M抗N M M 型 N N 型 M N 型 红细胞游离 单个 “- ”红细胞凝集 成簇 ‘‘ ” 2 ．2 固定红细胞 参照B R 6 方法 [ 6 1 l 、用取样器取O ．1 m lC A P 患者外周抗凝全血 2 、入洗涤液至1 ．0 m l ； 3 、3 7 ℃孵育l m i n ； 4 、加入1 0 m l 固定液； 5 、室温放置1 ．5h 6 、加入O ．8 m l3 7 ％甲醛，室温固定过夜； 2 ．2 荧光标记红细胞 参照B R 6 方法 1 6 ] 1 、固定过夜的红细胞离心 1 2 0 0 r ／m i n 。7 m i n ，弃上清； 2 、加3 m lS B 洗涤3 次 1 0 0 0 r ／m i n ，5 m i n ，弃上清； 3 、加入l m lS B ； 4 、加入荧光抗体6 R 7 ．P E 和B R T C ．1 5 7 标记染色，避光3 7 。C 振荡孵育 1 2 0 次／分钟，l h ； 5 、加l m lS B 洗涤2 次 1 0 0 0r ／m i n ，6 m i n ，弃上清； 6 、加入l m l P I 液，孵育l m i n ； 7 、过5 0 0 日尼龙筛网，使细胞数达到8 1 0 7 c e l l ／m l 。 毕鼗论文燃缫摇姊孛毒患者箨周盘红粕艟照￡型糖蛋白A 突变频率抟研究9 2 ．3 突变红细胞的确定 参照B R 6 方法 [ 6 1 M N 血型患者外周血突变的红细胞分为N t 9 、N N 、M 妒和M M 型。N i p 秘N N 只能结合绿色荧光抗体，不结合红色荧光；M 母秘M M 只能结 合红色荧光抗体，不结合绿色荧毙。羧照B R 6 方法，蠲标准ⅪM 、N N 、 M N 三型红细胞荧光标记后混合样跖作为标准样品。根据标准样品中M M 、 M N 、N N 的位鬣，并视待测样品中M N 的荧光强度范围的偏移作适当调整， 以M N 的绿色荧光强度范围的8 0 ％作为N 母、N N 出现区；以M N 的红色荧 光强发范霆戆8 0 ％俸荛醚争、M M 窭襞嚣 銎1 。 2 ．5 样品检测 用流式细胞仪 B e c t o nD i c k i n s o n 公司 检测，采用氯离子激光器，激 发波长4 8 8 n m 。采样细胞数为l x l 0 6 ，皋样率6 0 0 0 7 0 0 0 c e i l ／s ，{ 导至4 颂参数羲海散射光F S C 、翅囱激射毙 S S C ≥、F I T C 一绿色荧宠 F L l 、 P E ．红色荧光 F L 2 。F L l 、F L 2 均作对数处理。 2 ．6 、统计学处骥 实验数据蚜荻蘧数圭蠡准差碧瓣 表示。垒罄炎鼹熬疆、分蘩鹭采j { l S P S S1 0 ．0 统诗软佟进行。采用糗和检验避行统计分辑，梭验水准a 0 ．0 5 ， P 2 0 年 3 、C A P 患者肿瘤蕴与非肿瘤雏比较 与C A P 患者非齄瘗鳃比较，黠癯缎G P A - M F N N M F 、N 妒一M F 、 M M M F 、M q ．M F 均显著升高 J P 0 ．0 1 见表4 ，图5 ； 液4 肿瘤组与非肿瘤鳃C A P 患者G P A 突变率比较 分缎 nN N x l O - 6 N 9 x 1 0 ，6 M M 1 0 - 6 M o p 1 0 6 非肿瘤纽 3 41 9 ．4 1 士1 2 ．8 52 9 ．3 5 i 2 1 ．5 31 0 2 ．1 5 士6 0 ．0 91 5 ．9 7 二i 1 4 ．5 0 肿瘤组6 3 1 ．5 0 j t 6 ．1 3 5 4 ．5 0 E 3 8 ．1 3 1 5 9 ．3 d 6 6 ．2 2 ‘4 5 ．1 ￡1 2 ．6 9 注4 P 0 ．0 5 ，与菲静瘩纽匏较 率业论文燃煤型砷串毒患者外周血红细胞肌型糖蛋白A 突变频率的研究 僻 铽 赋 5 0 ‘ 0 0 } 采 圈5 肿瘤组与非肿瘤组C A P 患者G P A ．M F 比较 讨论 。非肿瘤组 。脾瘢纽 G P A 蹩蠢人类豢荣色傣4 q 2 8 。3 1 上一个共显经表这缒多态等倥藜嚣壤 弼，1 3 1 个氨蕊酸组成的一种人红细胞骨架蛋白l I l 一4 1 ，它同时又楚一种血 溅蛋白，因其多肽链氨基末端上2 个氨撼酸残基的不同而以G P A M 和 G P A N 嚣静等位影武存在，决定藿M N 盘壁系统。穰撂这费盘蹙分型 系统，分为M M 、N N 、M N 三种血型；其中M M 、N N 为纯合型，人群中 约各占2 5 ％；M N 为杂合型，人群中约5 0 ％为这种血型【1 5 ．1 7 1 。 遂每人强磅究炭囊巍糖傣接簸蠢褰壤霞嚣素戢受毫磁辐袈这一定程 度时，可导致骨髓中红系遣斑干细胞的G p A 基因位点发生突变而产生相应 的突变型红细胞，由于这矛} 突变是中性突变，它不仅能在体内长期存在， 蟊在英终生逵斑逶程孛遵过不蘩产生稿巍麴突交鍪红瓣施嚣毒誓G P A M F 砉寺 久稳定地反映出来，所产搬的突变型红细胞的表型和功能并不发生改变。 因此，G P A 可作为一种终出生物剂量计，通过检测G P A ．M F ，不仅可以估 箕獒长豢接皴鸯害理铯嚣豢魏零予，嚣惹露燕子译黪拿体癌惠燕羧翡潜势 击，_[㈠U』削茹 o 0fh ∞ ∞ ∞ o 擎韭谂文燃潆攒璐孛毒惑者舞翻趣红纲熬盘型糖鬣自A 突变额攀靛搿} 究1 4 [ J 8 - 2 0 ] 。突变后的M N 血型个体外周血中存在四种突变型红细胞即N N 、N ∞、 M M 及M 母。周不鞠荧光素标记的M 、N 单克隆抗体标记红缓怼，结合流 式细胞技术，可分离、鉴剐出这蹿辩突交型红细胞。 本实验检测到藏常人G P A ．M F N N ．M F 为0 。7 2 t 4 ．1 7 1 0 击N q ．M F 为 1 2 ．6 7 t 1 6 。9 5 x t 0 6 ；M M - M F 为 1 3 ．1 7 圭1 2 。7 0 x 1 0 ；M q - M F 为 5 ．2 2 士8 ．9 0 1 0 ～，这与以往文献报道值相近似㈣钟。 我们通过对4 0 例C A P 患者G P A ．M F 的榱测发现C A P 患者的外周瓶 G P A M F 显著高于正常入，并曩艘潼翘豹G P A - M F 臻显离予非瓣擅组的糖 应值。大簧的流行瘸学资昔莘已诞实长期接触无杌碎可【；f 等致皮肤及内脏 组织线器官的癌变【‘1 ；在动物宴验和细胞培游研究中也发现砷可以导致 染色依赡交、姐妹絷色单体互换及徽棱率螬如{ 2 M 郇。近年寒曲谤究发现， 体细胞突交在瓣瘸的发生发展中起着促遘俸曩l ，祷G P A 突变分析技术是霹 前国内外较先进的一种体细胞突变分析方法，我们应用该技术对4 0 名临床 诊断的C A P 患者G P A - M F 透行了捡测，发现C A P 惠孝戆N N 、N 9 、M M 及M 9 突变率不但明显高于对照组，而且呈倍数增加；肿瘸缝也明显高予 非肿瘸组。提示长期接触无机砷，可以导致骨髓中造血干细胞G P A 繁因 位点发生突交，遘褥| 起终藩赢缎细貔G P A - M F 璞亵，G P A - M F 蕴可髂 为检测有否砷中毒的一项可靠的指标；接触觅机砷可以引起体细胞突变频 率增高，这可能在C A P 患者的蠲癌患风险中发挥重要作用。 零谚窕递一步缀讨了C A P 惠喾G P A - M F 与其砷接整裁鬣之阉毒无量效 关系，结果发现，不同病程的C A P 患者G P A - M F 虽有所增加，但差异冗 统计学意义。这是_ 番与样本量小有关，尚待避一步研究。 矮G P A 突交分糖技寒捡测体绥戆突变戆方法虽然翥分蟹速疫浃、灵敏、 用血鬣少、稳定性与重复性好等优点。但目前的技术仅能对人群中M N 杂 合型个体M F 进行测定，而人群中约5 0 ％M M 、N N 纯合型者的G P A 突变 魏捡溺方法瀣泰建囊，毒一定薅怒藏穗． 毕业论文 燃媒型砷中毒患者井焉血红细胞疵型耱蛋白A 突变颠牢的研究 1 5 结论 1 、A P 可导致人类势髑盘红细戆G P A 稳突交。 2 、G P A ．M F 值可作为一项检测有否砷中毒的指标。 3 、G P A M F 值可用于预测与评估C A P 患者的癌患风险。 毕业论文燃煤型砷申毒患者扑阚g t t l 互N l l 胞m } 型糖蛋白A 突变频率的研究1 6 参考文献 1 、运书，杜辉，程明亮等．燃煤型砷中毒患者死因的调查．中国地方病学 杂志，2 0 0 2 ，2 】 6 5 8 ～6 0 2 、W e i n b e r gR 。A ，e ta 1 ．T h ea c t i o no f o n c o g e n e si nt h ec y t o p l a s ma n dn u c l e u s ． S c i e n c e W a s h ．D ．C ，19 8 5 ，2 3 0 7 7 0 - 7 7 6 3 、B i g b e eW L ，L a n g l o i sR G ，S w i f tM ，e ta 1 ．E v i d e n c ef o ra ne l e v a t e d f r e q u e n c yo f i nv i v os o m a t i cc e l lm u t a t i o n si na t a x i at e l a n g i e c t a s i a 。A mJ H u m G e n e t ，19 8 9 ，4 4 4 0 2 4 0 8 4 、L a n g l o i sR G ，B i g b e eW L ，K y o l z u m iS ，e ta 1 ．E v i d e n c e f o ri n c r e a s e d s o m a t i cc e l lm u t a t i o n sa tt h eg l y c o p h o r i nAl o c u si na t o m i cb o m b s u r v i v o r s ． S c i e n c e ，19 8 7 ，2 3 6 4 4 5 4 5 8 5 、S a n d i e rS G ，e ta 1 ．B i o l o g i c a lf u n c t i o n so f b l o o d g r o u p s i nh e a l t ha n dd i s e a s e ． H a e m a t o l o g i a B u d a p ，1 9 9 5 ，2 7 1 1 - l 3 6 、R i c h a r dG ，L a n g l o i sR G ，B a r b a r aA ，e ta l ，A ni m p r o v e df l o wc y t o m e t r i c a s s a y f o rs o m a t i cm u t a t i o n sa tt h e g l y c o p h o r i n Al o c u si nh u m a n s ． C y t o m e t r y ，1 9 9 0 ，1 l 5 1 3 - 5 2 1 7 、汪谦主编．现代医学实验方法．匏索人民卫生出版社，1 9 9 7 8 、J e n s e nR H ，B i e b e e W L ，L a n g l o s i sR G ，e ta 1 ．E l e v a t e df r e q u e n c yo f g l y c o p h o r i nA m u t a t i o n si ne r y t h r o c y t e sf r o mc h o m o b ya c c i d e n tv i c t i m s ． R a d i a tR e s ，1 9 9 5 ，l 2 1 2 9 1 3 5 9 、S c h i w i e t zJ 。L o r e n zR ，S e h e u b e c kM ，e ta 1 ．I m p r o v e dd e t e r m i n a t i o no f v a r i a n te r y t h r o c y t e sa tt h eg l y c o p h o r i nAl o c u sa n dv a r i a n tf r e q u e n c yi n p a t i e n t st r e a t e dw i t hr a d i oi o d i n ef o rt h y r o i dc a n c e l I n tjR a d i a tB i o l ， 1 9 9 6 ，7 0 2 1 3 1 - 1 4 3 l O 、 桂红熙，程文英，罗韦华等人，红细胞血型糖餐自A 位点正常变异 及黪瘙藏疼戆影睫。上海医毒辜夫学掌缀，1 9 9 9 ，2 6 2 9 1 ．9 4 11 、 C o o k 阳，L i n d e n b a u mR H ，S a l o n e n ＆D ￡L aC h a p e l l eA ．T h eM N S s 毕业论文燃臻拦弹串毒患者终竭l 艇红细鹣盘型糖蛋蠡A 突变赣率瓣垮院1 7 b l o o dg r o u po ff a m i l i e sw i t hc h r o m o s o m e4 r e a r r a n g e m e n t s ．A n nH u m G e n e t ，1 9 8 1 ，4 5 3 9 4 7 1 2 、R a h u e lC ，L o n d o nJ ，d ’A u r i o lL 、e ta 1 ．C h a r a c t e r i z a t i o no fe D N A c l o n e sf o rh u m a n g l y c o p h o r i nA ．U s ef o rg e n el o c a l i z a t i o na n df o ra n a l y s i s o f n o r m a la n dg l y c o p h o r i n A d e f i c i e n t F i n n i s ht y p e g e n o m i cD N A ．E u rJ B i o t h e m ，1 9 8 8 ，1 7 2 1 4 7 - 1 5 3 13 、K u d oS ，F u k u d aM ．S t r u c t u r a lo r g a n i z a t i o no f g l y c o p h o r i nA a n dB g e n e s g l y c o p h o r i nBg e n ee v o l v e db yh o m o l o g o u sr e c o m b i n a t i o n 蠢A l u r e p e a ts e q u e n c e s ．P r o c N a t lA c a dS c iU S A ，1 9 8 9 ，8 6 4 6 1 9 4 6 2 3 1 4 、 V i g n a lA ，R a h u e lC ，E lM a l i k iB ，L e V a nK i mC ，L o n d o nJ ，C a r t r o nJ R M o l e c u l a r a n a l y s i so fg l y c o p h o r i nA a n dB g e n es t r u c t u r ea n de x p r e s s i o ni n h o m o z y g o t e sM i l t e r b e r g e r c l a s s V M i V h u m a ne r y t h r o c y t e s ．E u rJ B i o c h e m ，1 9 8 9 ，1 8 4 3 3 7 - 3 4 7 15 、 F u r t h r a a y rH ．G l y c o p h o r i n sA ，B ，C a I s o l a t i o na n d p r e l i m i n a r y c h a r a c t e r i z a t i o n J s u p r a m o lS t r u c t ，1 9 7 8 ，9 7 9 9 5 f a m i l yo fs i a l o g l y c o p m t e i n s o ft r y p s i n - d e r i v e d p e p t i d e s 1 6 、D a h r W U h l e n b r u c kG ，J a n s s e nE ，S c h m a l i s c hR ．D i f f e r e n tN t e r m i n a l a m i n oa c i d si nt h eM ，Ng l y c o p r o t e i nf r o mM Na n dN N e r y t h r o c y t e s ．H u m G e n e t ，1 9 7 7 ，3 5 3 3 5 4 3 1 7 、B l u m e n f e l d o o ，P u g l i aK V ．P r e p a r a t i o n o f c y a n o g e n b r o m i d e f r a g m e n t so f 鹾麓，N N ，a n dM Ng l y e o p r o t e i n s g l y c o p h o r i n s f r o mh u m a n e r y t h r o c y t em e m b r a n e so f s i n g l ed o n o r s 。B i o c h i mB i o p h v sA c t a ．1 9 7 9 ，5 7 9 9 5 - 1 0 6 1 8 、 龟建平，董燕，孙志贤．两例钻源事故受照者和体外照射正常人外 周血的红细脆G P A 变异频率分祈．军事医学科学院院刊，2 0 0 0 ，2 4 1 3 6 ．3 9 t 9 、L a n g l o i sR G ，B i g b e eW L ，K y o l z u m iS ，戎a 1 ．E v i d e n c ef o ri n c r e a s e d s o m a t i cc e l lm u t a t i o n sa tt h eg l y c o p h o r i nA l o c u s 。i n ；a t o m i cb o m bs u r v i v o r s 毕业论文燃煤型砷中毒患者外周m 红细胞J f l L 型糖蛋白A 突变频率的研究 1 8 S c i e n c e ，1 9 8 7 ，2 3 6 4 4 5 - 4 4 8 2 0 、桂喜群，左连塞，刘洪群筹人 应翅F C M 捡测食蟹癌羲瘸变患者 红细胞膜血型糖蛋白A 的表达．中华物理医学杂志，1 9 9 4 ，1 6 2 1 7 ．2 1 9 2 1 、G u r rJ R ，L i uF ，L y n nS ，e t a l ，C a l c i u m - d e p e n d e n t n i l f i co x i d e p r o d u c t i o ni s i n v o l v e di na r s e n a t e i n d u c e dm i c r o n u c l e i [ J ] ．M u t a t i o nR e s ， 1 9 9 8 ，4 1 6 1 3 7 - 1 4 8 2 2 、W i e n c k eJ K ，Y a g e rJ W , V a r k o n y iA ，e ta 1 ．S t u d yo fa r s e n i cm u t a g e n e s i s u s i n g t h e p l a s m i d s h u t t l ev e c t o r p Z t 8 9 p r o p a g a t e d i nD N Ar e p a i r p r o f i c i e n t h u m a n c e l l s [ J ] ．M u t a t i o nR e s ，1 9 9 7 ，3 8 6 3 3 5 3 4 4 2 3 、H s u e H ，Y a n gS A ，W a n gJ Y , e t a 1 ．M u t a t i o n a ls p e c t r u mo f p 5 3g e n e i n a r s e n i c ，r e l a t e ds k i nc a n c e r sf r o mt h eb l a c k f o o td i s e a s ee n d e m i cs r e ao f T a i w a n [ J ] 。B r i t i s h jC a n c e r , 1 9 9 9 ，8 0 1 0 8 0 1 0 8 6 2 4 、 符刚，张信江．p 5 3 、p 1 6 和祝网膜母细胞瘸蛋自在燃煤型砷中毒患 者度蓣串的表达．中华痰肤稃杂志，2 0 0 2 ，3 5 4 3 - 4 4 血型耱蛋自A 及其突变分析技术 血型糖蛋白A 及其突变分析技术 徐海环综述 张信汪教授窜校 红细胞膜上的糙蛋妇分鼹大类涎糖蛋白 S i a l o g l y c o p r o t e i n 和区繁 3 糖餐白 b a n d3g l y c o p r o t e i n 。涎糖蚕白分为丑种血型糖蛋白A g l y c o p h o r i n A ，G P A 、血型糖得白B g l y c o p h o r i n B ，G P B 、血型糖 蛋白C g l y c o p h o r i n C ，G P C 、血型榭蛋白D g l y c o p h o r i n D ，G P D 和 血型糖蛋白E g r y c o p h o r i n E ，G P E 。其中G P A 是红细胞表面数目较多 昀一种糖蛋自。区带3 稽蛋白占膜蛋白总量的2 5 ％，主要楚阴离子交换蛋 白，乙酰糙碱鬻酶秘N a 、K ．A T P 酶l 豫1 。 G P A 是人红蠡缒簇表匿蜜含囔液酸豹跨膜撩蛋自，它不仅德游壶红细 憨之阙以及红缎臆与盘管肉发细戆之阅媳聚集，瞧可蝴接影噙红细憨摸懿 形态及膜媳柔顺性与机械稳定性。逐年研究发现，G P A 除了上述功能外， 还是体细胞突变研究中衣价值的分子标记。它可作为一种终生生物刘蹙计， 通过检测个体G P A 基因突变频率 m u t a t i o n 弁e q u e n c y ，M F 估计其长期甚至 终生接触有害环境理化因素的水平，亦可用于评估个体癌患风险的潜势。 现就G P A 及其突变分析技术作一翻顾。 一、G P A 的分予结构 G P A 是1 9 7 t 年由F a i r b a n k s l 3 1 等入首先发现的。窀是跨越红细胞膜富 含唾液酸麓糖蚤鑫，每个红缎戆表疆约农5 0 万个这种糖繁自，含糖鳖约 6 0 ％，在默链N 寒蟪懿1 5 簸上带番9 条糖链。G P A 基滚位子人类喾袋色体 4 q 2 8 。3 1 t 4 - 5 1 ，包含7 令钋照予，编码霉骛切憋镶号漱孝1 3 1 个氨基酸蛉G P A 簧自[ 6 - 7 1 。外显予l 和部分钋显子2 编码信号肽；处显予2 到4 编码G P A 的 胞外辖区，包括7 0 个氨基酸残基；而跨膜区的2 2 个氨基酸残基和胞浆区 斑裂糖蛋自A 及其突变分析技术 的3 9 个氨基泼残基则由第5 、6 和7 外照子编码【8 ‘9 1 。由第2 外显予编码的 熬努区氨基蝼魏第1 彝第5 位氨基酸残纂决定残熬R B C 戆M 、N 矗壅抗琢 憾，当氨基末端1 、5 位分别为丝氨酸 S e r 和甘氨酸 G l y 时为M 血型； 幽相应位置为巍氨酸 L e u 和谷氨酸 G l u 时为N 血型。此外，分子中 其它氨羹酸戆廖列麓稳囊。嚣G P A 仅露一令售号获帮一枣跨貘辖嚣，掰阪 G P A 为典型的I 型跨膜蛋白[ 1 0 - H ] 。 二、G P A 懿垒褥学襄藏 对多种非红系细胞组织及非红系细胞株的m R N A 分析以及对这些细 胞表面抗原的免疫细胞化学分析证明G P A 分子的袭达仅限于红系细胞 1 1 2 - 1 3 1 。遂一步磺兖还发鬟，G P A 主要袋达予歪常红数憨垒痰逶程较浇黧除 段的细胞膜上，在红系爆武集落形成单俄 B F U ．E 和红系及集藩形成单 位 C F U ．E 的前褪细胞中来能检测到G P A [ 1 4 - 1 6 ] 。下面仅对成熟红细胞G P A 魏垒貔学功能予滋溪逑。 1 、G P A 袭面携带着大蹙的唾液酸。红细胞表面8 0 ％9 0 唾液酸 S i a 集 中在G P A 表谳，为血细胞袋面提供了众多的静负电荷，进而避免了在血液 锈繇串红细魏秘蠹疫细稳毅及红缍戆之麓戆聚集l 翻。 2 、作为～种重要的红细胞膜骨架蚤白，G P A 间接影响红细胞形态、 红细胞膜柔顺性和机械稳定性。C h a s i s [ t 8 ．1 9 ] 发现正常G P A 分子的胞内辖 嚣与簇蚤絮撼没有或便蠢较枣绚穗互箨麓，耋嚣黎毒G P A 分子结合以后， G P A 分子胞内辖区的构象发生变化，G P A 与膜骨架的结合变得紧密，它在 膜内的侧向运动便减弱，从而降低了红细胞膜柔性，另外，G P A 分予与配 体结合君还潜如了族魏煎瞧。嚣魏，G P A 龟莛磅究缬魏阌联系、缬缝簇嚣 絮及细胞形态学的重要功能委白。 3 、G P A 怒由人类常染色体4 q 2 8 。3 ‘上一个共显性农达的多态昝位基因 编码，1 3 1 个氨基酸蕴藏魏一释人红蟹魏骨絮蛋蠹，它瓣靖又是一释血型蛋 综述m 型糖蛋白A 及其突变分析技术 白，因其多肽链氨基末端上2 个氨基酸残綦的不同而以G P A M 和G P A N 两静落位影式存在，决定着M N 蛊鍪系统。校据这耱血